南昌大學第一附屬醫院熊文俊獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉南昌大學第一附屬醫院申請的專利一種細胞線粒體自噬的檢測方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120028300B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510150205.6,技術領域涉及:G01N21/64;該發明授權一種細胞線粒體自噬的檢測方法是由熊文俊;龔紹林;熊文龍;蔣婷設計研發完成,并于2025-02-11向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種細胞線粒體自噬的檢測方法在說明書摘要公布了:本發明涉及生物學自噬檢測技術領域,本發明公開了一種細胞線粒體自噬的檢測方法及系統,本方法通過構建實驗平臺模擬細胞微環境,結合熒光探針標記、動態監測和基因調控,實現對線粒體自噬動態變化的實時監測與定量分析。與現有技術相比,本發明在多個方面展現了其獨特的優越性:首先,通過微流控技術可獨立調節細胞內藥物和基因狀態,實現樣本的并行處理,顯著提升檢測效率;其次,采用定量熒光成像與數據處理的新策略,不僅提高了信號的可靠性,更明確了生物標志物的選擇機制,從而增強了自噬狀態的識別精確性;本發明通過綜合分析熒光信號與基因調控之間的關系,為研究線粒體自噬的分子機制提供了更為系統的實驗基礎。
本發明授權一種細胞線粒體自噬的檢測方法在權利要求書中公布了:1.一種細胞線粒體自噬的檢測方法,其特征在于:包括, 構建實驗平臺模擬細胞微環境; 所述實驗平臺包括,選擇細胞培養基及生長條件,構建模擬細胞微環境的系統,其中包含溫度、pH、氧氣水平和營養物質濃度的控制; 在培養器中設計微流控通道,允許樣本在各個通道中流動,每個通道可以獨立改變樣本的藥物和基因狀態,完成并行測試; 通過熒光探針標記線粒體自噬相關蛋白,并進行動態監測,捕捉熒光信號; 通過基因調控選擇載體,定量分析熒光信號,識別并篩選生物標志物;所述基因調控包括,確定目標基因,針對選定基因的gRNA,引入外源性Cas9蛋白,使用電穿孔法將gRNA和Cas9轉染到細胞中,通過抗生素篩選和基因組測序確定基因編輯成功的細胞株; 建立動態模型描述基因表達水平: 其中,G表示基因表達水平,Eg表示CRISPR靶向效率,T表示轉錄因子的濃度,K表示半飽和常數,β表示調節因子; 當CRISPR系統的靶向效率提升時,基因表達水平隨之上升,同時轉錄因子的濃度也顯著影響基因的表達,隨著濃度的增加,基因表達水平在初始階段隨著轉錄因子的增加而快速上升,達到濃度閾值后,增速減緩,最終趨于穩定狀態,這種飽和效應通過半飽和常數捕捉;非線性調節因子表達曲線的形狀; 所述識別并篩選生物標志物包括,使用局部二值模式結合直方圖特征,提取自噬相關圖像特征,建立特征向量V: V=[f1,f2,...,fm] 其中,fm表示提取的第m個特征,m依據實驗設定的特征數量目標準備; 為每個特征fm計算統計顯著性值,選擇小于閾值α的特征: 其中,Sm為選擇結果,pm為特征顯著性值,每個特征的顯著性通過與背景噪聲的比較得出,只有在顯著性p值小于預設閾值α時,當前特征才被認為是生物標志物; 輸出可視化報告,展示自噬動態過程。
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