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龍圖騰網獲悉上海歐易生物醫學科技有限公司申請的專利一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法及應用獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN118166067B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202311780745.X，技術領域涉及：C12Q1/6806；該發明授權一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法及應用是由范黎明;王佳琦;朱燕敏;石今朝;殷昊;肖云平設計研發完成，并于2023-12-22向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法及應用在說明書摘要公布了：本發明公開了一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法，包括如下步驟：組織清洗和預處理：將人硬骨組織置于離心管中，用DPBS浸泡，顛倒離心管清洗人硬骨組織，并用預冷的BL緩沖液孵育進行預處理；組織處理和酶解：將孵育后的人硬骨組織和BL緩沖液通過細胞篩網，用預冷的PBS沖洗組織2～3次；將細胞篩網上的人硬骨組織轉移到培養皿中并加入BE溶液，剪小組織，補加BE溶液；將培養皿放入37℃恒溫培養箱，酶解15min，每5min搖晃培養皿；酶解結束后，使用移液器將酶解液轉移到新的離心管中；細胞分離和收集：使用細胞篩過濾酶解液，用含0.1％mvBSA的預冷DPBS沖洗細胞篩網；將濾液置于水平離心機中離心，收集細胞。

本發明授權一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法及應用在權利要求書中公布了：1.一種適用于全轉錄測序的人硬骨組織細胞的獲得方法，其特征在于，使用BL緩沖液、BE溶液和人硬骨細胞保護劑制備人硬骨組織的細胞懸液；包括如下步驟： 步驟I、組織清洗和預處理：將人硬骨組織置于離心管中，用DPBS浸泡，顛倒離心管清洗人硬骨組織，并用預冷的BL緩沖液進行預處理；使用所述BL緩沖液進行硬骨脫無機處理，將人硬骨組織加入BL緩沖液進行所述脫無機處理，去除硬骨中的硬基質，將細胞外基質暴露至緩沖液中；所述脫無機處理的溫度為4℃～6℃，處理時間為10min～15min，期間每隔2-3min進行30s水平搖晃； 步驟II、組織處理和酶解：將所述預處理后的人硬骨組織和BL緩沖液通過100μm細胞篩網，用預冷的PBS沖洗組織2～3次；將所述細胞篩網上的人硬骨組織轉移到培養皿中并加入BE溶液，剪小組織，補加BE溶液；將培養皿放入37℃恒溫培養箱，酶解15min，每5min搖晃培養皿；酶解結束后，使用移液器將酶解液轉移到新的離心管中； 步驟III、細胞分離和收集：使用40μm細胞篩過濾酶解液，用含0.1％mvBSA的預冷DPBS沖洗細胞篩網；將濾液置于水平離心機中離心，收集細胞； 步驟Ⅳ：人硬骨組織細胞保護處理： 步驟a、向人硬骨組織細胞懸液離心得到的細胞沉淀中加入人硬骨細胞保護劑，重懸細胞沉淀，并混勻懸液； 步驟b：將步驟a中的保存細胞用的離心管放置于4～6℃環境中，靜置8～10min； 步驟c：向離心管中加入預冷的DPBS，上下顛倒混勻4～5次，置于水平離心機中離心富集細胞； 所述BE溶液的成分為：使用1×HBSS溶解的0.2％～0.25％mv膠原酶I和0.2％～0.25％mv木瓜蛋白酶； 所述BL緩沖液的成分為：0.005～0.01M鹽酸，0.1％～0.2％vv吐溫20，0.1％～0.2％mv谷胱甘肽，0.01M～0.02M三2-羧乙基膦，使用去離子水配置，pH＝5.5～6； 所述人硬骨細胞保護劑的成分為：2～3％vv多聚甲醛PFA、0.05～0.1％mv果膠、ddH2O。

如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術，可聯系本專利的申請人或專利權人上海歐易生物醫學科技有限公司，其通訊地址為：201114 上海市閔行區浦江鎮聯航路1188號浦江智谷25號樓歐易生物總部；或者聯系龍圖騰網官方客服，聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。