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龍圖騰網(wǎng)獲悉山東萬邦賽諾康生化制藥股份有限公司申請的專利一種低分子量肝素鈉的酶解制備方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN120026071B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-02發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202510490514.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12P19/26；該發(fā)明授權(quán)一種低分子量肝素鈉的酶解制備方法是由李正想;李玲;叢義國設(shè)計研發(fā)完成，并于2025-04-18向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種低分子量肝素鈉的酶解制備方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明涉及酶解技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種低分子量肝素鈉的酶解制備方法，S1.1、對肝素鈉預處理，并與保護劑結(jié)合，得到肝素復合物沉淀；S1.2、對肝素復合物沉淀第一次酶解，得到上清液A和沉淀物；S1.3、對沉淀物調(diào)節(jié)pH釋放高硫酸化片段，得到上清液B；S1.4、對上清液B二次酶解，得到二次酶解液，合并上清液A和二次酶解液過濾得到截留液；S1.5、對截留液后處理，得到低分子量肝素鈉；采用檸檬酸修飾的超順磁性Fe3O4納米顆粒與氨基化杯芳烴共價偶聯(lián)的復合保護劑，精準調(diào)控酶解路徑與高效分離，解決了傳統(tǒng)工藝中分子量不均、收率低及純化復雜的問題。

本發(fā)明授權(quán)一種低分子量肝素鈉的酶解制備方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種肝素鈉的酶解制備方法，其特征在于： S1.1、對肝素鈉預處理，并與保護劑結(jié)合，得到肝素復合物沉淀； S1.2、對肝素復合物沉淀第一次酶解，得到上清液A和沉淀物； S1.3、對沉淀物調(diào)節(jié)pH釋放高硫酸化片段，得到上清液B； S1.4、對上清液B二次酶解，得到二次酶解液，合并上清液A和二次酶解液過濾得到截留液； S1.5、對截留液后處理，得到低分子量肝素鈉； 其中，保護劑由檸檬酸表面修飾超順磁性Fe3O4納米顆粒后，與氨基化杯芳烴共價偶聯(lián)制備而成； 所述保護劑制備的步驟具體為： S2.1、將超順磁性Fe3O4納米顆粒超聲處理分散于水中，并加入檸檬酸，然后調(diào)節(jié)pH至4-6，加熱至60-80℃攪拌2-4h，磁分離后，用去離子水和乙醇洗滌，真空干燥獲得羧基化Fe3O4納米顆粒； S2.2、將羧基化Fe3O4納米顆粒分散于磷酸鹽緩沖液中，超聲處理20-30min，磁分離后棄上清液，并重新分散在磷酸鹽緩沖液中，加入1-乙基-3-3-二甲氨基丙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫攪拌50-60min，得到活化Fe3O4懸浮液； S2.3、將氨基化杯芳烴分散于磷酸鹽緩沖液中，加入活化Fe3O4懸浮液中，通氮氣保護，室溫避光攪拌反應3-4h，磁力攪拌速度300-400rpm，控制pH為7.0-7.4，反應結(jié)束后，加入濃度為0.1-0.5%vv的乙醇胺，繼續(xù)攪拌1-1.5h，磁鐵分離后，依次用磷酸鹽緩沖液和去離子水洗滌，真空干燥得到保護劑； 所述肝素復合物沉淀第一次酶解的具體步驟為： 將肝素復合物沉淀重新分散于磷酸鹽緩沖液，得到2-5%wv的肝素復合物沉淀溶液，加入混合肝素酶，200-300rpm，35-37℃恒溫反應6-8h，升溫至80-85℃維持10-15min，冰浴快速冷卻至2-4℃，最后磁分離，收集上清液A和沉淀物；其中，混合肝素酶為肝素酶I：II=2：1Umg肝素鈉；總酶量為5-10Umg肝素鈉； 所述S1.3中，上清液B的具體制備步驟為： 將沉淀用磷酸鹽緩沖液重懸，得到1-3%wv的沉淀重懸溶液，調(diào)節(jié)溶液pH至9.0-9.5，在200-300rpm下攪拌10-15min，磁分離移除保護劑，上清液B備用； 所述截留液的具體制備步驟為： 將上清液B調(diào)節(jié)pH至6.8-7.2，向上清液中補加肝素酶III，35-37℃繼續(xù)反應3-4h，80-85℃滅活10-15min，得到二次酶解液，合并上清液A和二次酶解液，用0.22μm濾膜預過濾，再用截留分子量3-5kDa的超濾膜10000-12000rpm離心20-30min，棄透析液，截留液備用；其中，肝素酶III量為3–5Umg肝素鈉。

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