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龍圖騰網(wǎng)獲悉浙江工業(yè)大學(xué)申請(qǐng)的專(zhuān)利基于RNA干擾動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專(zhuān)利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN120099065B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-29發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)為：202510591662.9，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/81；該發(fā)明授權(quán)基于RNA干擾動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法是由吳杰群;王曼曼;蔡倩茹;朱進(jìn)妹設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2025-05-09向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專(zhuān)利申請(qǐng)。

本基于RNA干擾動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明提供了一種基于RNA干擾動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法。該方法通過(guò)重建一個(gè)正交RNAi系統(tǒng)，將釀酒酵母作為一個(gè)具有動(dòng)態(tài)可編程質(zhì)粒拷貝數(shù)的合成生物學(xué)底盤(pán)，并通過(guò)整合來(lái)自卡斯特利釀酒酵母的異源RNAi機(jī)制，設(shè)計(jì)靶向質(zhì)粒編碼選擇標(biāo)記的序列特異性siRNA，建立了一個(gè)化學(xué)誘導(dǎo)的基因劑量控制平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒拷貝數(shù)的動(dòng)態(tài)調(diào)控，從而優(yōu)化基因表達(dá)劑量，提高生物合成效率。將RNAi介導(dǎo)的拷貝數(shù)調(diào)節(jié)應(yīng)用于類(lèi)胡蘿卜素生物合成途徑，與靜態(tài)質(zhì)粒系統(tǒng)相比，番茄紅素滴度增加了18.6倍。該方法進(jìn)一步豐富了合成代謝調(diào)控的工具集，在提升微生物細(xì)胞工廠生產(chǎn)性能方面的巨大潛力，為合成生物學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的代謝工程優(yōu)化提供了新思路。

本發(fā)明授權(quán)基于RNA干擾動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.一種動(dòng)態(tài)調(diào)控釀酒酵母中質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法，其特征在于，包括：在釀酒酵母細(xì)胞中重建RNA干擾通路，并利用化學(xué)誘導(dǎo)的發(fā)夾RNA表達(dá)模塊靶向質(zhì)粒編碼的選擇標(biāo)記基因，實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒拷貝數(shù)的動(dòng)態(tài)調(diào)控；所述發(fā)夾RNA表達(dá)模塊包括β-雌二醇誘導(dǎo)系統(tǒng)、與選擇標(biāo)記基因同源的發(fā)夾結(jié)構(gòu)序列； 所述在釀酒酵母細(xì)胞中重建RNA干擾通路的方法包括：將來(lái)源于卡斯特利釀酒酵母的DCR1基因、AGO1基因分別整合到釀酒酵母基因組的中性位點(diǎn)；所述釀酒酵母基因組的中性位點(diǎn)包括：416d位點(diǎn)、308a位點(diǎn)； 所述化學(xué)誘導(dǎo)的方法包括：通過(guò)引入至釀酒酵母基因組上的β-雌二醇誘導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)發(fā)夾RNA表達(dá)模塊進(jìn)行調(diào)控； 所述β-雌二醇誘導(dǎo)系統(tǒng)包括：與β-雌二醇結(jié)合的DNA結(jié)合域ZF97-4、雌激素配體結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄激活域VP16、含有97-4操作子的工程化啟動(dòng)子； 所述質(zhì)粒為含有2μ復(fù)制子的高拷貝質(zhì)粒； 所述選擇標(biāo)記基因包括：抗生素抗性基因、營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記基因。

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