2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法,寧波大學(xué),發(fā)明授權(quán)"/>
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          寧波大學(xué)喬朝暉獲國(guó)家專利權(quán)

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          龍圖騰網(wǎng)獲悉寧波大學(xué)申請(qǐng)的專利基于Ag-MoS2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán),本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予,授權(quán)公告號(hào)為:CN120427903B

          龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-26發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉:該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為:202510929580.0,技術(shù)領(lǐng)域涉及:G01N33/569;該發(fā)明授權(quán)基于Ag-MoS2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法是由喬朝暉;鮑朝輝;王珍;薛靚靚;肖文雪;金育安設(shè)計(jì)研發(fā)完成,并于2025-07-07向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

          基于Ag-MoS2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法在說(shuō)明書摘要公布了:本發(fā)明公開(kāi)了基于Ag?MoS2納米酶的比色?熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法,特點(diǎn)是包括將單鏈S1、單鏈S2、單鏈S3、單鏈S4、沙門氏菌適配體和cDNA混合制備得到多價(jià)適配體競(jìng)爭(zhēng)性探針溶液的步驟;將發(fā)夾探針H1和發(fā)夾探針H2分別溶解在PBS的步驟;制備Ag?MoS2納米酶復(fù)合材料的步驟;將待測(cè)沙門氏菌溶液與多價(jià)適配體競(jìng)爭(zhēng)性探針混合孵育后,加入Ag?MoS2納米酶復(fù)合材料進(jìn)行CHA擴(kuò)增反應(yīng),然后加入H2O2溶液和TMB溶液進(jìn)行過(guò)氧化物酶催化反應(yīng),分別進(jìn)行比色法和熒光法的檢測(cè),計(jì)算得到待測(cè)溶液中沙門氏菌濃度的步驟,優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高且實(shí)現(xiàn)檢測(cè)后實(shí)時(shí)滅菌。

          本發(fā)明授權(quán)基于Ag-MoS2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法在權(quán)利要求書中公布了:1.一種基于Ag-MoS2納米酶的比色-熒光雙信號(hào)檢測(cè)沙門氏菌的方法,本方法不以診斷或治療為目的,其特征在于包括以下步驟: 步驟1、TDN探針的制備: 將25μM的單鏈S1溶液、25μM的單鏈S2溶液、25μM的單鏈S3溶液、25μM的單鏈S4溶液、10μM的沙門氏菌適配體溶液、10μM的cDNA溶液和TM緩沖液按體積比1:1:1:1:10:10:26的比例混合后退火處理,得到多價(jià)適配體競(jìng)爭(zhēng)性探針溶液;其中 所述的單鏈S1的核苷酸序列為SEQIDNO.1所示:5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTATCACCAGGTCAGTCTGACAGTGTAGCAGAGCTGTAGATAGATGCTGAGGAGTCCAATAC-3'; 所述的單鏈S2的核苷酸序列為SEQIDNO.2所示:5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTCAGACTGACCTGGTGATAAAACGACACTGACGTGGTGAATCTACTATGTGCGTGCATCTC-3'; 所述的單鏈S3的核苷酸序列為SEQIDNO.3所示:5'-TCGATGACCCACTCTCACTTTTCAGACTGTAGGAAGTGTGCTTCACCACGTCAGTGTCGTTTGTATTGGACTCCTCAGCAT-3'; 所述的單鏈S4的核苷酸序列為SEQIDNO.4所示:5'-GTGAGAGTGGGTCATCGAAAAAACTCCTCTGACTGTAACCACGGTGGTTTGATCACTATTGGGCCTTTCTGATGTCGGTAGT-3'; 所述的沙門氏菌適配體的核苷酸序列為SEQIDNO.5所示:5'-GTGAGAGTGGGTCATCGAAAAAACTCCTCTGACTGTAACCACGGTGGTTTGATCACTATTGGGCCTTTCTGATGTCGGTAGT-3'; 所述的cDNA的核苷酸序列為SEQIDNO.6所示:5'-CAAACCACCGTGGTTACAGT-3'; 步驟2、發(fā)夾探針的制備: 將發(fā)夾探針H1溶解在PBS緩沖液后進(jìn)行退火處理,得到濃度為1.5μM的H1溶液;將發(fā)夾探針H2溶解在PBS緩沖液后進(jìn)行退火處理,得到濃度為1μM的H2溶液,其中所述的發(fā)夾探針H1的核苷酸序列為SEQIDNO.7所示:5'-FAM-ACCGTGGTTACAGTCCATGTGTAGAACTGTAACCACGGTGGTT-BHQ-3’,所述的發(fā)夾探針H2的核苷酸序列為SEQIDNO.8所示:5'-TGGTTACAGTTCTACACATGGACTGTAACCACGGTAGTCCATGTGTAGA-3'; 步驟3、Ag-MoS2納米酶復(fù)合材料的制備: 將濃度為2mgmL的MoS2溶液與5mMAgNO3溶液按體積比1:1的比例混合后,加入MoS2質(zhì)量0.05-0.2%的檸檬酸三鈉攪拌后,離心分離取沉淀,用乙醇和去離子水反復(fù)洗滌后干燥得到Ag-MoS2納米材料,將H1溶液、H2溶液與1mgmL的Ag-MoS2納米材料溶液混合后孵育,得到Ag-MoS2納米酶復(fù)合材料; 步驟4、熒光法檢測(cè)沙門氏菌: 取待測(cè)樣品加入步驟1制備得到的多價(jià)適配體競(jìng)爭(zhēng)性探針溶液中,在室溫下孵育1小時(shí),然后加入步驟3制備得到的Ag-MoS2納米酶復(fù)合材料,在室溫下孵育30分鐘進(jìn)行CHA反應(yīng),得到CHA反應(yīng)產(chǎn)物,用酶標(biāo)儀在激發(fā)波長(zhǎng)為492nm,發(fā)射波長(zhǎng)為518nm處記錄產(chǎn)生的熒光信號(hào),根據(jù)熒光強(qiáng)度與沙門氏菌濃度之間的定量關(guān)系,計(jì)算獲得待測(cè)樣品中沙門氏菌的濃度; 步驟5、比色法檢測(cè)沙門氏菌: 在步驟4得到的CHA反應(yīng)產(chǎn)物中繼續(xù)加入50mMH2O2溶液和50mMTMB溶液進(jìn)行過(guò)氧化物酶催化反應(yīng),用酶標(biāo)儀在635nm處測(cè)量吸光度,根據(jù)吸光度值與沙門氏菌濃度之間的定量關(guān)系,計(jì)算獲得待測(cè)樣品中沙門氏菌的濃度。

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