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龍圖騰網(wǎng)獲悉浙江工業(yè)大學(xué)申請的專利一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN119915933B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-23發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202510100344.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N30/02；該發(fā)明授權(quán)一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法是由朱培曦;劉艷妮;吳杰群設(shè)計研發(fā)完成，并于2025-01-22向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法，包括：弗氏鏈霉菌細(xì)胞收集及淬滅，胞內(nèi)代謝物提取，LC?MS檢測，數(shù)據(jù)處理與分析。該方法通過非靶向代謝組學(xué)方法對弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期樣品進(jìn)行研究，分析弗氏鏈霉菌細(xì)胞發(fā)酵過程中主要差異代謝物種類、豐度及代謝通路，闡明差異代謝物影響弗氏鏈霉菌細(xì)胞發(fā)酵的調(diào)控機制，從而促進(jìn)弗氏鏈霉菌的代謝組學(xué)及代謝工程研究，進(jìn)一步提高其工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用價值。

本發(fā)明授權(quán)一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種弗氏鏈霉菌不同發(fā)酵時期差異代謝物的分析方法，其特征在于，包括如下步驟： 1）胞內(nèi)代謝物處理： ①細(xì)胞收集與淬滅 取不同發(fā)酵時期的弗氏鏈霉菌發(fā)酵液，離心以除去培養(yǎng)基中大部分固體雜質(zhì)，細(xì)胞沉淀經(jīng)沖洗后加入溶液淬滅劑，快速混合渦旋、均質(zhì)，置于低溫條件下孵育，真空抽濾快速過濾，收集固體樣品； ②代謝物提取 將處理后的固體樣品置于離心管中，加入代謝物提取液及內(nèi)標(biāo)，渦旋均勻后，置于冰塊中超聲提取胞內(nèi)代謝物，超聲結(jié)束后離心，離心后得到的沉淀加入相同體積的提取液置于冰塊上再次超聲進(jìn)行二次提取，超聲結(jié)束后離心，合并兩次上清液，離心后取上清過膜至進(jìn)樣小瓶進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定； 2）液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定； 3）數(shù)據(jù)處理及分析： 通過步驟2）測試得到的數(shù)據(jù)導(dǎo)入代謝組學(xué)處理軟件進(jìn)行基線過濾、峰識別、積分、保留時間校正、峰對齊和歸一化處理，得到含保留時間、質(zhì)荷比和峰強度信息的數(shù)據(jù)矩陣；其后進(jìn)行特征峰搜庫鑒定，將MS和MSMS質(zhì)譜信息與Metlin、KEGG、PubChem數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配，MS質(zhì)量誤差設(shè)置為小于10ppm，同時根據(jù)二級質(zhì)譜匹配得分鑒定代謝物；使用方差分析對不同組的樣本代謝物進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，包括非監(jiān)督模式下的主成分分析和監(jiān)督模式下的PLS-DA分析，篩選出VIP＞1，具有顯著性差異p0.05且化合物響應(yīng)值差異變化大于2倍的化合物，即為組間的差異性代謝物；通過KEGG數(shù)據(jù)庫對篩選出的差異代謝物進(jìn)行代謝通路富集和整體變化分析； 步驟2）中的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定的操作條件如下：液相參數(shù)：色譜柱：ACQUITYBEHC18柱，2.1mm×100mm，1.7μm；柱溫：35℃；流速：0.2mLmin；進(jìn)樣體積：2μL；流動相A：0.1%甲酸水；流動相B：乙腈；梯度洗脫的程序如下：0-20min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)由95％減少至75%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)由5%增加至25％；20-25min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)由75%減少至10%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)由25%增加至90%；25-26min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)由10%增加至95%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)由90%減少到5%，26-30min，流動相A體積分?jǐn)?shù)為95%，流動相B體積分?jǐn)?shù)為5%； 質(zhì)譜參數(shù)：質(zhì)譜在正離子轉(zhuǎn)換模式下進(jìn)行全掃描測定，質(zhì)量范圍：mz50～1500；毛細(xì)管電壓：3000V；干燥氣流速：8Lmin；碎裂電壓：160V；干燥氣溫度：325℃；鞘氣溫度：325℃；鞘氣流速：11Lmin；霧化氣壓力：40psi。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人浙江工業(yè)大學(xué)，其通訊地址為：310014 浙江省杭州市拱墅區(qū)朝暉六區(qū)；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。