廣西中醫(yī)藥大學楊慶利獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉廣西中醫(yī)藥大學申請的專利用于同時定量檢測HBV cccDNA和HBV rcDNA的核酸組合、試劑盒及方法獲國家發(fā)明授權專利權,本發(fā)明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116064955B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-19發(fā)布的發(fā)明授權授權公告中獲悉:該發(fā)明授權的專利申請?zhí)?專利號為:202211246673.6,技術領域涉及:C12Q1/70;該發(fā)明授權用于同時定量檢測HBV cccDNA和HBV rcDNA的核酸組合、試劑盒及方法是由楊慶利;李海;梁亮設計研發(fā)完成,并于2022-10-12向國家知識產權局提交的專利申請。
本用于同時定量檢測HBV cccDNA和HBV rcDNA的核酸組合、試劑盒及方法在說明書摘要公布了:本發(fā)明提供了用于同時定量檢測HBVcccDNA和HBVrcDNA的核酸組合、試劑盒及方法,涉及分子生物學技術領域。所述核酸組合包括:跨越所述HBVrcDNA負鏈上的缺口的簡并引物,所述簡并引物如SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示;以及用于擴增HBVDNA的qPCR引物,所述qPCR引物用于擴增HBVPreCC基因或S基因。本發(fā)明利用cccDNA和rcDNA分子結構差異,設計引物使cccDNA正鏈模板拷貝數等比例增加,之后與未進行cccDNA預擴增的樣品同時進行qPCR,定量HBVDNA并對比,計算出cccDNA和rcDNA的初始拷貝數。本發(fā)明能夠簡單高效地同時實現對HBVcccDNA和rcDNA的準確和高效定量。
本發(fā)明授權用于同時定量檢測HBV cccDNA和HBV rcDNA的核酸組合、試劑盒及方法在權利要求書中公布了:1.一種以非疾病診斷和或治療為目的的定量檢測HBVcccDNA和HBVrcDNA的方法,其特征在于,包括: (a)使用如SEQIDNo.1所示的簡并引物預擴增HBVcccDNA; 預擴增HBVcccDNA反應液如下,總體積5μL: 2×TBGreenFastqPCRMix2.5μL; HBVDNA模板1.0μL; 10μM的SEQIDNo.1的簡并引物0.1μL; ddH2O1.4μL; 預擴增HBVcccDNA反應條件如下: (b)使用qPCR的上下游引物同時定量檢測HBVcccDNA和rcDNA; HBVDNAqPCR條件如下: HBVDNA定量反應液如下,總體積40μL; 2×TBGreenFastqPCRMix17.5μL; 第一步PCR反應液5.0μL; 25μM的上游引物0.8μL; 25μM的下游引物0.8μL; ddH2O15.9μL; HBVDNA對照qPCR:定量HBV總DNA的拷貝數;反應液如下,總體積40μL; 2×TBGreenFastqPCRMix20.0μL; HBVDNA模板1.0μL; 25μM的上游引物0.8μL; 25μM的下游引物0.8μL; ddH2O17.4μL; 所述HBV的基因型為C、B和I,所述上下游引物如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示; (c)根據定量方程組,通過計算HBVcccDNA預擴增前后DNA模板的增加量以及比較qPCR所得到的HBV總DNA的拷貝數,計算出HBVcccDNA和HBVrcDNA初始拷貝數; 定量方程組如下所示: ; c:標本初始HBVcccDNA的拷貝數; r:標本初始HBVrcDNA的拷貝數; N0:cccDNA預擴增前HBVDNA定量拷貝數; Nn:cccDNA預擴增n個循環(huán)后HBVDNA定量拷貝數。
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