廣東省農業科學院作物研究所余倩霞獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉廣東省農業科學院作物研究所申請的專利一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法及應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120272523B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-16發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510765002.8,技術領域涉及:C12N15/83;該發明授權一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法及應用是由余倩霞;林燦佳;田學義設計研發完成,并于2025-06-10向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法及應用在說明書摘要公布了:本發明屬于植物生物技術領域,具體涉及一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法及應用。所述方法包括:通過CiPDS特異性片段構建重組pTRV2?PDS載體,利用農桿菌介導的病毒侵染體系,以本氏煙為過渡寄主制備病毒汁液,通過摩擦接種實現TRV病毒對美人蕉的有效侵染。本發明首次在美人蕉中建立VIGS技術體系,突破傳統異源轉化技術的局限性,解決了因缺乏高效基因功能驗證工具導致的美人蕉花器官發育研究滯后問題。同時,通過優化溫度與接種材料選擇,顯著提升沉默穩定性和表型可觀測性。
本發明授權一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法及應用在權利要求書中公布了:1.一種TRV病毒誘導美人蕉內源基因沉默表達體系的建立方法,其特征在于,包括如下步驟: (1)從美人蕉中提取目標基因CiPDS的特異性片段,設計引物擴增CDS區段,并在引物5'端引入限制性酶切位點和同源重組序列; 所述引物序列為: TRV-PDS-Xbal-F:AGGTTACCGAATTCTATGGATATCATCGGGGCCAT TRV-PDS-Xbal-R:CCCCATGGAGGCCTTAAAATCTTTGCAGACAACCT; (2)將步驟(1)獲得的基因片段通過同源重組連接至線性化的pTRV2載體,構建重組病毒載體pTRV2-CiPDS; (3)將重組病毒載體pTRV2-CiPDS轉化農桿菌GV3101,與輔助載體TRV1農桿菌等比例混合后注射本氏煙葉片,培養6~12天后收集病毒汁液; (4)將病毒汁液摩擦接種至美人蕉葉片,在18℃條件下培養,誘導目標基因沉默; (5)通過表型觀察和qRT-PCR驗證基因沉默效率; 所述CiPDS基因的編碼區序列為804bp,共編碼268氨基酸; 所述CiPDS基因編碼區全長核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
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