重慶海關技術中心聶福平獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉重慶海關技術中心申請的專利基于陣列模式和CRISPR/Cas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒及試紙條試劑盒獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115074466B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210770266.9,技術領域涉及:C12Q1/70;該發明授權基于陣列模式和CRISPR/Cas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒及試紙條試劑盒是由聶福平;曹改花;史梅梅;熊亦帆;侯長軍;楊俊;王昱;李應國;霍丹群;王國民設計研發完成,并于2022-06-30向國家知識產權局提交的專利申請。
本基于陣列模式和CRISPR/Cas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒及試紙條試劑盒在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于陣列模式和CRISPRCas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒及試紙條試劑盒。首先基于VARVB22R和RPO30基因進行PCR擴增,擴增產物包含了LSDV、SPPV和GTPV的特異性區域。隨后利用CRISPRCas12a系統對擴增產物進行特異性識別。基于兩對引物和3個CRISPRCas12a系統構建熒光陣列模式,對LSDV、SPPV和GTPV進行準確、特異性地鑒別。在CRISPRCas12a系統和PCR擴增模式下,針對LSDV、SPPV和GTPV的實際檢測分別低至50copies,40copies,60copies。另外,采用CRISPRCas12a專用試紙條結合陣列模式實現了對CaPV分型的Point?of?care檢測,方便養殖戶或者企業對病毒的監測和鑒別。相比與其他分型的檢測方法,本發明基于陣列模式可以更加準確和全面地對LSDV、SPPV和GTPV的鑒別,并具有更高的靈敏度。
本發明授權基于陣列模式和CRISPR/Cas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒及試紙條試劑盒在權利要求書中公布了:1.基于陣列模式和CRISPRCas12a的羊痘病毒屬分型檢測試劑盒,其特征在于:包括兩對引物和三條crRNA序列,其序列如下所示: B22R-Forward引物:5’-CTTTTTCCATGATATGGTGGGC-3’ B22R-Reverse引物:5’-TGAATGTGATCTCATATCCTTATTG-3’ RPO30-Forward引物:5’-TCTATGTCTTGATATGTGGTGGTAG-3’ RPO30-Reverse引物:5’-AGTGATTAGGTGGTGTATTATTTTCC-3’ crRNA1序列: 5’-AAUUUCUACUAAGUGUAGAUUAAAAAAAGAAAAAAAAAAAG-3’ crRNA2序列: 5’-AAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUACAAAUAAAUAAAUUGCUU-3’ crRNA3序列: 5’-AAUUUCUACUAAGUGUAGAUUACUGAAGUUGUUUAUUUUCA-3’ 進行羊痘病毒屬分型檢測時,包括兩個體系: PCR體系:2×ExTaqProbeqPCRMIX12.5μL,1μL10μMB22R-Forward引物和B22R-Reverse引物、或者RPO30-Forward引物和RPO30-Reverse引物,8.5μLddH2O和2μL待檢樣品;擴增程序為:95℃5min;35個循環:95℃10s,55℃15s和72℃15s;最后,72℃10min延伸;分別擴增B22R和RPO30基因; CRISPRCas12a體系:取B22R擴增反應液4μL分別加入到crRNA1和crRNA2的CRISPRCas12a體系中;取4μLRPO30基因擴增液加入到crRNA3的CRISPRCas12a體系中;CRISPRCas12a包含1μMLbCas12a2μL,1μMcrRNA2μL,1μL10μMssDNA-FQreporter,2μL10×NEBbuffer2.1和9μLddH2O;所述crRNA為crRNA1序列、crRNA2序列或crRNA3序列,分別構建包含crRNA1、crRNA2、crRNA3的CRISPRCas12a體系。
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