江西省人民醫院李星獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉江西省人民醫院申請的專利一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120210105B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510690126.4,技術領域涉及:C12N5/071;該發明授權一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法是由李星;吳杰;吳西雅;田愛蘇;徐華亮設計研發完成,并于2025-05-27向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法在說明書摘要公布了:本發明涉及細胞分離提取技術領域,提供一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法。包括以下步驟:步驟S1:霧化收集誘導痰后,挑出痰栓,加入含有0.1%wt羥甲司坦和0.1%吐溫?20的pH=6.0等滲磷酸鹽緩沖液進行溶解,得到富含細胞外囊泡的誘導痰溶解液;其中溶解的溫度為37±0.1℃,在搖床轉速為50±1rpm條件下消化15±1min;步驟S2:誘導痰溶解液通過負壓尺寸排阻色譜法提取細胞外囊泡。本發明采用羥甲司坦和吐溫?20的多組分溶解劑促進痰液溶解并保護細胞外囊泡中的蛋白質和核酸不被降解;負壓尺寸排阻色譜能精確控制負壓驅動的流速,確保細胞外囊泡在色譜柱中穩定遷移,避免因流速過快導致的囊泡破裂或流速過慢導致的分離效率低下。
本發明授權一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法在權利要求書中公布了:1.一種從誘導痰中提取細胞外囊泡的方法,其特征在于,包括以下步驟: 步驟S1:霧化收集誘導痰后,挑出痰栓,加入含有0.1%wt羥甲司坦和0.1%vol吐溫-20的pH=6.0等滲磷酸鹽緩沖液進行溶解,得到富含細胞外囊泡的誘導痰溶解液;其中溶解的溫度為37±0.1℃,在搖床轉速為50±1rpm條件下消化15±1min; 步驟S2:誘導痰溶解液通過負壓尺寸排阻色譜法提取細胞外囊泡,具體步驟為: 步驟S21:將誘導痰溶解液進行離心,獲得第二上清液,其中離心條件為17000g,4±0.1℃,30±1min,第二上清液為二次上清液; 步驟S22:將第二上清液經0.22μm濾器過濾后,獲得的濾液加入負壓尺寸排阻色譜柱; 步驟S23:當濾液完全進入負壓尺寸排阻色譜柱后,加入磷酸鹽緩沖液;其中磷酸鹽緩沖液分成6-8次加入;前1-2次和最后1次加入磷酸鹽緩沖液后生成的餾分流空,其他加入磷酸鹽緩沖液后生成的餾分全部收集,得到細胞外囊泡懸液。
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