華子昂;萬君興;竹添獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉華子昂;萬君興;竹添申請的專利增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN109280682B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:201811007661.1,技術領域涉及:C12P21/00;該發明授權增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法是由華子昂設計研發完成,并于2018-08-31向國家知識產權局提交的專利申請。
本增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法在說明書摘要公布了:本發明提供了一種增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法,其中,包括以下步驟:1設置沖擊波設備作用模式及作用參數包括:壓強、頻率、頻次;2準備繼代培養的血管內皮細胞或實驗小鼠體內血管內皮細胞,離心后,用10%的完全培養液重懸移植到培養皿中,再利用探頭對細胞進行沖擊波處理;3完成沖擊波處理后,繼續培養60小時,再分離血管內皮細胞利用熒光定量PCR方法檢測P?選擇素基因表達量,以GAPDH基因為參考內標。本發明通過沖擊波增強血管內皮細胞的P選擇素表達,不需要其他藥物或化學品刺激,操作簡便、效果顯著,尤其是在活體內的血管內皮P選擇素表達上有絕對優勢,是未來干細胞歸巢及干細胞相關技術的發展基礎。
本發明授權增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法在權利要求書中公布了:1.一種增強血管內皮細胞表達P選擇素的方法,包括以下步驟: 步驟1:設置沖擊波設備作用模式及作用參數,包括:壓強、頻率、頻次; 步驟2:準備繼代培養的血管內皮細胞或實驗小鼠體內血管內皮細胞,離心后,用10%的完全培養液重懸移植到培養皿中,再利用探頭對細胞進行沖擊波處理; 步驟3:完成沖擊波處理后,繼續培養,再分離血管內皮細胞利用熒光定量PCR方法檢測P-選擇素基因表達量,以GAPDH基因為參考內標; 步驟2中,所述的繼代培養的血管內皮細胞制備方法為:從液氮中取出原代人心臟微血管內皮細胞凍存管,37℃水浴箱融化,傳至已左旋多聚賴氨酸包被的培養瓶中,放入一定適量的內皮細胞培養基,在37℃、5%二氧化碳培養箱中培養,2~3d換液,4~5d傳代1次,用胰酶消化細胞,實驗采用第5代細胞;所述原代人心臟微血管內皮細胞能夠選用活體內的血管內皮細胞; 步驟1中,所述的沖擊波參數范圍為壓力1.5-3.0bar、頻率8-12Hz、頻次為200次; 步驟3中,采用相對定量的方法對選擇素基因表達水平進行計算,采用目的基因與內參基因之間Ct值之間的差異來確定目的基因的表達量,以GAPDH作為內參基因,每個RNA樣品的定量PCR進行三個重復以消除系統誤差;步驟3中,采用的熒光定量PCR方法檢測為:用HighPureRNAIsolationKit提取總RNA,采用TaqManReverseTranscriptionRengents試劑盒將總RNA反轉錄為cDNA,取反轉錄產物cDNA模板2.5μL,按照TaqManGeneExpressionMasterMix說明書進行定量PCR檢測;步驟3中,所述繼續培養的時間為60小時。
如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術,可聯系本專利的申請人或專利權人華子昂;萬君興;竹添,其通訊地址為:102399 北京市門頭溝區石龍經濟開發區永安路20號3號樓A-6331室;或者聯系龍圖騰網官方客服,聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。
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