買專利賣專利找龍圖騰，真高效！ 查專利查商標用IPTOP,全免費！專利年費監控用IP管家,真方便！

龍圖騰網獲悉華中農業大學申請的專利一種基于CRISPR/Cas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法獲國家發明授權專利權，本發明授權專利權由國家知識產權局授予，授權公告號為：CN115747306B 。

龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發布的發明授權授權公告中獲悉：該發明授權的專利申請號/專利號為：202211095808.3，技術領域涉及：C12Q1/6825；該發明授權一種基于CRISPR/Cas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法是由陳翊平;魏露雨;王知龍設計研發完成，并于2022-09-08向國家知識產權局提交的專利申請。

本一種基于CRISPR/Cas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法在說明書摘要公布了：本發明涉及食品安全分析技術領域。本發明提供了一種基于CRISPRCas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法，包括如下步驟：提取待檢樣品的基因組DNA；制備MNP?ploy?ALP并利用靶標激活的Cas12a對其進行反式切割；磁分離，上清液中加入磷酸化抗壞血酸酯；加入CuII、疊氮?MNP偶聯物和炔基?MNP偶聯物；磁分離，未結合的疊氮?MNP偶聯物作為信號探針，測定對應溶液的橫向弛豫時間計算待測樣品中的目標物含量。本發明無需進行核酸預擴增即可實現MRSA的高靈敏檢測，避免了傳統靶標核酸擴增所帶來的交叉污染風險，為食品安全中MRSA的檢測提供了高靈敏、準確、快速的方法。

本發明授權一種基于CRISPR/Cas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法在權利要求書中公布了：1.一種非診斷和治療目的的基于CRISPRCas12a磁弛豫傳感器檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括如下步驟： （1）提取待檢樣品的基因組DNA； （2）將Cas12a蛋白、crRNA和1×NEbufferr2.1混合，孵育得到crRNA-Cas12a復合物； （3）利用固相RCA制備MNP-ploy-ALP； （4）將MNP-ploy-ALP、待檢樣品的基因組DNA和RNAase抑制劑混合，得到物料1； （5）將crRNA-Cas12a復合物和物料1混合，孵育后磁分離，在上清液中加入磷酸化抗壞血酸酯，孵育得到物料2； （6）將物料2、CuII溶液、疊氮-MNP偶聯物溶液和炔基-MNP偶聯物溶液混合，孵育得到物料3； （7）將物料3磁分離，未結合的疊氮-MNP偶聯物作為信號探針，通過測定對應溶液的橫向弛豫時間可以計算出待測樣品中的目標物含量； 步驟（3）中所述MNP-ploy-ALP的制備方法為： A、磁性納米顆粒-鏈霉親和素復合物的制備； B、DNA-ALP的制備：首先，將200μL濃度為10μM的thiol-DNA、10μL濃度為1M的PBS、5μL濃度為30mM的三2-羧乙基膦在37℃震蕩反應60min，然后將混合物轉移到Amicon-3K超濾管中，用緩沖液A在7500×g的條件下離心4次，每次30min，后重懸于200μL緩沖液A中；同時，將100μL濃度為10UmL的ALP與0.4mg的Sulfo-SMCC在室溫下孵育60分鐘；將混合物轉移到Amicon-30K超濾管中，使用緩沖液A在7500×g的條件下離心4次，每次10min，后重懸在200μL的緩沖液A中，得到激活的ALP；將激活的ALP和thiol-DNA溶液充分混合，在4℃孵育2小時；為了去除未結合的thiol-DNA，將混合物在Amicon-30K超濾管中用緩沖液A離心5次，最后重懸在100μL緩沖液A中保存于-20℃； 步驟B中所述緩沖液A中含有0.1M的NaCl和0.1M的NaAc，pH為7.3； C、MNP-ploy-ALP復合物的制備：取濃度為10μM的biotin-DNA2μL、濃度為10μM的padlock探針2μL、超純水13μL、10×ConnectorBuffer2μL在90℃下雜交5min，然后用PCR熱循環系統以0.1℃s的梯度速度緩慢冷卻至25℃；加入酶活力為2,000,000UmL的T4DNA連接酶1μL，室溫孵育2h,65℃水浴將酶滅活，得到混合液；取20μL混合液與100μLMNP-SA在室溫下混合60min，進行生物素-鏈霉親和素反應；用PBST洗滌3次后，將復合物分散在100μL的超純水中；隨后加入濃度為10mM的dNTPs2μL、酶活力為10,000UmL的phi29DNA聚合酶0.5μL、超純水67.5μL、10×phi29緩沖液20μL，在37℃下反應45min，進行RCA反應；用TBST緩沖液洗滌4次，在TBS緩沖液100μL中分散；加入20μLDNA-ALP，室溫反應30min，最后用TBST洗滌4次，去除未結合的DNA-ALP，在100μL的TBS緩沖液中重懸；得到MNP-ploy-ALP； 步驟（6）中所述疊氮-MNP偶聯物溶液為疊氮-MNP30偶聯物溶液，所述炔基-MNP偶聯物溶液為炔基-MNP1000偶聯物； 步驟（7）中所述未結合的疊氮-MNP偶聯物為未結合的疊氮-MNP30偶聯物。

如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術，可聯系本專利的申請人或專利權人華中農業大學，其通訊地址為：430070 湖北省武漢市洪山區獅子山街1號；或者聯系龍圖騰網官方客服，聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。