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龍圖騰網(wǎng)獲悉東南大學(xué)申請的專利一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN115058492B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-19發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202210798000.5，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/6806；該發(fā)明授權(quán)一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法是由趙祥偉;趙越;葛芹玉;葉凱強(qiáng);黨開同設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-07-07向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法，包括如下步驟：基于均分組合理念的DNA編碼微球的設(shè)計(jì)與制備；基于SCDB微球的轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建SCDB?seq的設(shè)計(jì)；基于SCDB?seq的空間轉(zhuǎn)錄組測序的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)。本方法可以以單細(xì)胞分辨率～10μm對新鮮冰凍樣本切片和福爾馬林固定石蠟包埋樣本切片上的微區(qū)進(jìn)行可選擇性的、高多路復(fù)用性的中通量50～1000樣本空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建，能夠可以選擇性地獲得組織切片中多個(gè)特定微區(qū)樣本的基因表達(dá)譜；本方法實(shí)驗(yàn)操作量和試劑成本僅為已有同類方法的～1％和～13％，展現(xiàn)出良好的人力和試劑成本控制。

本發(fā)明授權(quán)一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種基于均分組合編碼微球的空間轉(zhuǎn)錄組測序文庫構(gòu)建方法，其特征在于：包括如下步驟： （1）SCDB微球的設(shè)計(jì)與制備：使用兩段具有特定序列設(shè)計(jì)的引物：引物1-N，其中1≤N≤8，引物2-M，其中1≤M≤12，采用均分組合制備方法在微球表面進(jìn)行DNA條碼引物制備，將一定量的編碼微球均分為8份分別放入離心管并命名為1-N，向離心管中加入對應(yīng)引物1-N進(jìn)行第一輪編碼，隨后將8支離心管中的微球按照特定順序，即離心管1-1~1-8對應(yīng)96孔PCR板上的A~H排，均分至一塊96孔PCR板中加入對應(yīng)引物2-M進(jìn)行第二輪編碼，最終生成96種具有獨(dú)特DNA條碼組合的編碼微球，使用1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽將微球表面的羧基基團(tuán)轉(zhuǎn)換成可與氨基反應(yīng)的O-酰基異脲中間體，該中間體能夠迅速與5’端修飾有氨基基團(tuán)的引物1-N形成酰胺鍵，將引物1-N共價(jià)固定在微球表面，引物2-M的3’末端可與引物1-N的3’末端產(chǎn)生反向互補(bǔ)，隨后在等溫?cái)U(kuò)增DNA聚合酶的作用下將引物2-M中的序列反向互補(bǔ)延伸到引物1-N的3’末端，從而完成微球表面編碼引物的制備； （2）SCDB-seq的設(shè)計(jì)與使用：使用SCDB微球?qū)颖局械膍RNA進(jìn)行捕獲，對捕獲到的mRNA分子進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，通過PCR擴(kuò)增構(gòu)建滿足第二代測序的cDNA文庫，使用純化磁珠富集目標(biāo)cDNA片段； （3）基于SCDB-seq的空間轉(zhuǎn)錄組測序的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)：應(yīng)用于新鮮冰凍組織切片的實(shí)驗(yàn)方案在mRNA捕獲環(huán)節(jié)增加了0.5%濃度的TritonX-100以透化細(xì)胞膜，使mRNA得以從細(xì)胞中充分釋放且被SCDB微球捕獲；應(yīng)用于FFPE組織切片的實(shí)驗(yàn)方案除增加0.5%濃度的TritonX-100外，由于FFPE組織切片內(nèi)的mRNA已存在一定程度的降解，故取消了用于使mRNA發(fā)生片段化的Mg2+熱處理環(huán)節(jié)，且在mRNA釋放及捕獲環(huán)節(jié)添加0.125μgμL濃度的蛋白酶K并在60℃下進(jìn)行1h的孵育，充分去除FFPE組織中存在的分子間交聯(lián)，釋放出mRNA分子。

如需購買、轉(zhuǎn)讓、實(shí)施、許可或投資類似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)＠麢?quán)人東南大學(xué)，其通訊地址為：211189 江蘇省南京市江寧區(qū)東南大學(xué)路2號；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。