四川迪亞生物科技集團有限公司王書崎獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉四川迪亞生物科技集團有限公司申請的專利一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119040266B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411050297.2,技術領域涉及:C12N5/09;該發明授權一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法是由王書崎;胡文琪;吳迪;武國華;周煜森設計研發完成,并于2024-08-01向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法,首先,設計制備特定結構的高通量分析芯片;芯片為上下兩層結構,上層為水相流動層,下層為油相流動層;水相流動層包括水相入口和8個噴嘴陣列;水相為包裹白細胞、CTCs的GelMA溶液;油相流動層包括油相入口和8個油相通道,每個噴嘴陣列的下方設置1個油相通道,由噴嘴噴出的水相液滴滴入油相通道中形成油包水乳液;乳液經過紫外燈固化形成單細胞的液滴微球,收集微球進行破乳、離心獲得含有白細胞和CTCs的單細胞微球;將單細胞微球進行無血清DMEM培養,通過營養耗竭的方式去除白細胞,進行成球CTCs計數和培養。該方法的液滴生成速率快,吞吐量高,有利于快速完成臨床血樣的檢測。
本發明授權一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法在權利要求書中公布了:1.一種基于階梯乳化液滴的高通量CTCs分離培養方法,其特征在于,步驟如下: S1、制備高通量分析芯片; 所述芯片為上下兩層結構,上層為水相流動層,下層為油相流動層;所述水相流動層包括水相入口和噴嘴陣列,進入水相入口的水流被一分為八形成8個并列的支路,每個支路并列平行連接兩列噴嘴,即形成1個噴嘴陣列,共計形成8個噴嘴陣列;每列噴嘴中包括上百個噴嘴;所述油相流動層包括油相入口和8個油相通道,油相入口和水相入口分別位于芯片的左右兩端相對設置,每個噴嘴陣列的下方設置1個油相通道,油相通道上部敞口用于接收噴嘴噴出的水相液滴;8個油相通道并列設置且一端與油相入口連通,另一端設置液體出口;由噴嘴噴出的水相液滴滴入油相通道中與油相形成油包水乳液,最后從液體出口排出; S2、制備白細胞; S3、將油相從油相入口泵入到芯片的油相通道中,從水相入口泵入水相,所述水相為包裹白細胞、CTCs及光引發劑的多孔GelMA溶液,控制水相的泵入速率為500μLmin,油相的泵入速率為200μLmin,水相采用階梯的方式進入油相通道與油相進行乳化形成液滴;所述油相為Drop-Surf微液滴生成油;所述光引發劑為苯基2,4,6-三甲基苯甲?;姿徜圎},用量濃度為1%; S4、當油相通道中形成大量液滴后,乳液從液體出口排出,將乳液在365nm紫外燈下進行固化,固化時間大于5min,形成單細胞的液滴微球; S5、收集獲得的微球進行破乳、離心后去除包裹的油相,獲得含有白細胞和CTCs的單細胞微球; S6、將單細胞微球進行無血清培養基培養,在培養過程中白細胞逐漸失去活力,而CTCs成球生長,即通過營養耗竭的方式去除白細胞,進行成球CTCs計數和培養。
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