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龍圖騰網(wǎng)獲悉江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院申請(qǐng)的專利靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN120272530B 。

龍圖騰網(wǎng)通過(guò)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-12發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202510764006.4，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/85；該發(fā)明授權(quán)靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用是由陳坤琳;王慧利;高林娜;夏淑雯;沈陽(yáng)陽(yáng);丁強(qiáng);曹少先;崔兆康;張建麗;張俊;仲躋峰設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2025-06-10向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用在說(shuō)明書(shū)摘要公布了：本發(fā)明公開(kāi)了靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用，所述sgRNA核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。利用本發(fā)明sgRNA通過(guò)CRISPRCas9技術(shù)構(gòu)建獲得的乳腺上皮細(xì)胞系，F(xiàn)GFR1蛋白表達(dá)量顯著下調(diào)，且敲除FGFR1基因后對(duì)乳腺上皮細(xì)胞活力和增殖情況均無(wú)顯著影響，細(xì)胞中增殖關(guān)鍵基因PCNA、Cyclin D1、CyclinE1的mRNA表達(dá)均未出現(xiàn)顯著變化，但乳蛋白合成相關(guān)基因（如CSN1S1、CSN2、CSN3、EFL5）、乳糖合成相關(guān)基因（GLUT1和HKⅡ）及乳脂合成相關(guān)基因（SCD?1）的表達(dá)均顯著降低，為深入解析FGFR1在乳腺上皮細(xì)胞增殖、泌乳合成等生物學(xué)行為中的調(diào)控機(jī)制提供了關(guān)鍵工具。

本發(fā)明授權(quán)靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用在權(quán)利要求書(shū)中公布了：1.sgRNA在構(gòu)建FGFR1基因敲除的牛乳腺上皮細(xì)胞系中的應(yīng)用，其特征在于，所述sgRNA核苷酸序列：AGCAACCGCACGCGCATCAC（SEQIDNO：1）；構(gòu)建牛乳腺上皮細(xì)胞系的方法包括： （1）構(gòu)建sgRNA表達(dá)載體：將sgRNA引物退火獲得雙鏈DNA片段，通過(guò)DNA連接酶將雙鏈DNA片段連接到表達(dá)載體上，獲得sgRNA表達(dá)載體； sgRNA的引物核苷酸序列如下所示： sgRNA-F：accgAGCAACCGCACGCGCATCAC（SEQIDNO：2）， sgRNA-R：aaacGTGATGCGCGTGCGGTTGCT（SEQIDNO：3）； （2）牛乳腺上皮細(xì)胞電轉(zhuǎn)染：將sgRNA表達(dá)載體和Cas9表達(dá)載體電轉(zhuǎn)染牛乳腺上皮細(xì)胞，sgRNA表達(dá)載體帶有紅色熒光基因；48h后添加嘌呤霉素和殺稻瘟菌素進(jìn)行藥篩7d，隨后使用完全培養(yǎng)基恢復(fù)培養(yǎng)2d； （3）單克隆細(xì)胞株篩選與檢測(cè)：從恢復(fù)培養(yǎng)的細(xì)胞中篩選出帶有紅色熒光的細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，提取擴(kuò)大培養(yǎng)的各細(xì)胞總DNA作為模板，使用檢測(cè)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序來(lái)確定實(shí)現(xiàn)FGFR1基因敲除的牛乳腺上皮細(xì)胞株。

如需購(gòu)買(mǎi)、轉(zhuǎn)讓、實(shí)施、許可或投資類(lèi)似專利技術(shù)，可聯(lián)系本專利的申請(qǐng)人或?qū)＠麢?quán)人江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，其通訊地址為：210000 江蘇省南京市孝陵衛(wèi)鐘靈街50號(hào)；或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服，聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。