中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所王秀麗獲國家專利權(quán)
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龍圖騰網(wǎng)獲悉中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所申請的專利一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán),本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予,授權(quán)公告號為:CN120064644B 。
龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-09-09發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉:該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為:202510220548.5,技術(shù)領(lǐng)域涉及:C12N1/20;該發(fā)明授權(quán)一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法是由王秀麗;劉元杰;張媛;李俊平;李建設(shè)計研發(fā)完成,并于2025-02-26向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。
本一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法在說明書摘要公布了:本發(fā)明公開了一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法,將雞白痢沙門氏菌C79?1和C79?7株分別復(fù)蘇后制成種子液,接種適宜培養(yǎng)基,按照特定的工藝發(fā)酵培養(yǎng),滅活后離心收集菌體,121℃高壓2h并多次洗滌后去除易與大腸桿菌或其他環(huán)境中常在的腸桿菌科細菌發(fā)生交叉反應(yīng)的蛋白抗原組分,將C79?1株和C79?7株調(diào)整至適宜的菌濃度,加入Tween?20、結(jié)晶紫和甘油,充分勻漿獲得雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原。該抗原特異性更高,用于雞白痢凈化檢測時更精準;按照該酵工藝的細菌產(chǎn)率為普通發(fā)酵的4倍,為固體培養(yǎng)的2倍,無需乙醇沉淀,生產(chǎn)成本更低;加入Tween?20,增加抗原表面張力,解決使用時難以涂布均勻的問題,為雞白痢的凈化提供新的更優(yōu)的診斷試劑。
本發(fā)明授權(quán)一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法在權(quán)利要求書中公布了:1.一種高特異性的雞白痢雞傷寒沙門氏菌平板凝集抗原制備方法,其特征在于:包括以下步驟: (1)一級種子的制備 采用標準型雞白痢沙門氏菌C79-1株和變異型雞白痢沙門氏菌C79-7株分別接種普通瓊脂平板培養(yǎng);選擇通瓊脂平板上菌落接種普通瓊脂斜面培養(yǎng)基培養(yǎng),獲得一級種子;C79-1株和C79-7株的保藏編號分別為CVCC79201和CVCC79201; (2)二級種子的繁殖 一級種子接種普通肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得二級種子; (3)抗原高密度發(fā)酵培養(yǎng) 二級種子在發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng),收獲菌液,加入終濃度為0.2%的甲醛滅活12h,收獲菌液; (4)菌體處理 將步驟(3)中收獲的菌液以8000rpm離心20min,收集沉淀,用0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS重懸,置于121℃高壓2h,以8000rpm離心20min,收集沉淀,用0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS洗滌,至上清液澄清,用含2%甲醛的0.01molL,pH值7.0~7.2的PBS將菌體重懸,調(diào)整菌液濃度為5×1010CFUml; (5)抗原的配制 將標準型雞白痢沙門氏菌C79-1株和變異型雞白痢沙門氏菌C79-7株的菌懸液分別稀釋不同濃度,分別以50ul與等量含0.5IU的標準型變異型陽性血清國家標準品進行平板凝集試驗,以出現(xiàn)不低于50%凝集的菌液濃度,作為配制抗原的濃度; 所述步驟(3)中按照發(fā)酵液總量2%的比例接種二級種子在含普通肉湯培養(yǎng)基的發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng),37℃培養(yǎng),發(fā)酵期間控制溶氧40%,用氨水控制pH值在7.0~8.0,發(fā)酵12h后按照發(fā)酵液體積5%的比例加入40%葡萄糖,之后每4h補加1次葡萄糖,發(fā)酵至pH值開始上升時,加入終濃度為0.2%的甲醛滅活12h,收獲菌液。
如需購買、轉(zhuǎn)讓、實施、許可或投資類似專利技術(shù),可聯(lián)系本專利的申請人或?qū)@麢?quán)人中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,其通訊地址為:100086 北京市海淀區(qū)中關(guān)村南大街8號;或者聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)官方客服,聯(lián)系龍圖騰網(wǎng)可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網(wǎng)”。
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