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          山東東方海洋科技股份有限公司田萍萍獲國家專利權

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          龍圖騰網獲悉山東東方海洋科技股份有限公司申請的專利一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120391321B

          龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-02發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510908732.9,技術領域涉及:A01G33/00;該發明授權一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法是由田萍萍;李言;陳書秀;李曉捷;孫娟;趙聚萍;王利芹;史良;趙楠;李霞設計研發完成,并于2025-07-02向國家知識產權局提交的專利申請。

          一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法,屬于水產工程遺傳育種領域。將誘導絲狀體的雌、雄單細胞克隆系雜交,獲得四倍體孢子體。四倍體孢子體成熟放散游孢子,萌發形成二倍體配子體,后進行雌雄分離批量獲得二倍體雌性配子體克隆系。在本發明提供的培養條件下,利用二倍體雌配子體克隆系孤雌生殖進行苗種培育。這種二倍體雌配子體6~7d就開始排卵,比同期同條件下單倍體配子體的排卵時間顯著要早。12d排卵率達到86.5%,24d孢子體轉化率達到98.3%,且大部分孢子體形態正常。在育苗期間,二倍體雌配子體完成了孤雌生殖育苗。二倍體雌配子體可作為一種全新的海帶種質材料應用于海帶苗種培育。

          本發明授權一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法在權利要求書中公布了:1.一種利用二倍體雌配子體孤雌生殖進行海帶苗種培育的方法,其特征在于步驟如下: (1)批量獲得海帶二倍體雌配子體; (1.1)二倍體誘導絲狀體單細胞克隆系的建立:將作為體細胞來源的海帶誘導絲狀體研磨,過濾;在10±1°C,10~20μmol·m-2·s-1和光源為白光、每日24h光照下培養;3~5天后將單細胞吸出,移入容器中培養;在10±1°C,25~35μmol·m-2·s-1和光源為白光、每日24h光照下培養;待長至直徑為2~5mm的細胞團,將這些細胞團再次研磨,收集至另一容器中培養至所需量; (1.2)四倍體海帶的培育及海上養成:取表型雌性的海帶誘導絲狀體的單細胞克隆系為母本,取表型雄性的海帶誘導絲狀體的單細胞克隆系為父本,將母本和父本克隆以2:1的質量比例混合,噴灑在白色維尼綸繩編織的苗簾上;在8±1℃環境溫度下進行苗種培育;幼苗長度在1.5~2.0cm時下海暫養及夾苗養成; (1.3)批量地獲得海帶二倍體雌雄配子體:取步驟(1.2)養成的四倍體海帶成熟的孢子囊塊,殺菌消毒沖洗后,置于6~8℃的光照培養箱中避光陰干刺激2~5h;等游孢子密度達到100×鏡下每個視野有5~10個時停止放散,去除孢子囊塊,置于光照培養箱中培養,在10±1°C,20~30μmol·m-2·s-1和光源為白光、每日24h光照下培養20~30天; 在顯微鏡下將雌吸出,移入容器中培養;在10±1°C,30~40μmol·m-2·s-1和光源為白光、每日24h光照下培養;待細胞段長至直徑3~5mm的細胞團,將這些細胞團再次研磨,收集至容器中培養至所需量; (2)海帶二倍體雌配子體孤雌生殖苗種培育; (2.1)孤雌生殖:打碎二倍體雌配子體,過濾到2%PES培養基中培養;溫度、光照強度及光周期均為10±1℃、40~50μmolphotons·M-2·s-1、10L:14D; (2.2)孤雌生殖育苗:將二倍體雌配子體作為親本在育苗庫進行孤雌生殖育苗,孤雌生殖育苗培養基為2%PES培養基,光源均為白光; 所述的2%PES培養基按照以下步驟制備而成: 一、貯備液配制 配制貯備液1:取H3BO31.9g,FeCl30.05g,MnSO4·H2O0.273g,ZnSO4·7H2O0.0367g,CoSO4·7H2O0.008g,0.5MpH8的EDTA溶液11.4mL,用蒸餾水溶解后定容至1000mL;并配制貯備液2:稱取維生素B123.35mg,維生素B1165mg,生物素1.65mg,TRIS166.5g,用蒸餾水溶解定容至500mL;并配制貯備液3:稱取六水合硫酸亞鐵銨1.7g,0.5molLpH8的EDTA溶液6.8mL,用蒸餾水溶解后定容至1000mL;并配制貯備液4:稱取硝酸鈉23g,用蒸餾水溶解定容至1000mL;并配制貯備液5:稱取五水合甘油磷酸鈉3.33g,用蒸餾水溶解定容至1000mL;并配制0.5M、pH8的EDTA溶液:稱取6.5g氫氧化鈉,加入75mL蒸餾水中,攪拌至完全溶解,加入14.6gEDTA,繼續攪拌至完全溶解,用氫氧化鈉調節pH至8.0,用蒸餾水將溶液定容至100mL 二、2%PES培養基配制 首先配制PES貯備液:分別取100mL貯備液1、貯備液3、貯備液4和貯備液5及10mL貯備液2,用蒸餾水溶解,調節pH值至7.8,并用蒸餾水定容至1000mL;然后2%PES培養基配制:取2mLPES貯備液,用高壓蒸汽滅菌海水溶至100mL,再次滅菌備用。

          如需購買、轉讓、實施、許可或投資類似專利技術,可聯系本專利的申請人或專利權人山東東方海洋科技股份有限公司,其通訊地址為:264003 山東省煙臺市萊山區澳柯瑪大街18號;或者聯系龍圖騰網官方客服,聯系龍圖騰網可撥打電話0551-65771310或微信搜索“龍圖騰網”。

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