中國科學院上海有機化學研究所;中國科學院上海有機化學研究所湖州生物制造創新中心劉文獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中國科學院上海有機化學研究所;中國科學院上海有機化學研究所湖州生物制造創新中心申請的專利VWB-attP和φC31-attP整合酶介導的基因重組方法及在鏈霉菌中應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN113584068B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202010360644.7,技術領域涉及:C12N15/76;該發明授權VWB-attP和φC31-attP整合酶介導的基因重組方法及在鏈霉菌中應用是由劉文;張慶林;馮俊寅;潘佳明;陳單丹;王杰設計研發完成,并于2020-04-30向國家知識產權局提交的專利申請。
本VWB-attP和φC31-attP整合酶介導的基因重組方法及在鏈霉菌中應用在說明書摘要公布了:本發明提供了一種VWB?attP和φC31?attP整合酶介導的基因重組方法及在鏈霉菌中應用。具體地,本發明利用VWB?attP整合酶和φC31?attP整合酶系統介導的位點特異性整合機制將這兩種整合酶模塊構建在同一個含有目的基因的質粒中,通過屬間接合轉移可快速將需要表達的目的基因以多拷貝的數量重組至鏈霉菌染色體的相應attB位點上。本發明的方法在阿維菌素,紅霉素和林可霉素產生菌中進行了應用。
本發明授權VWB-attP和φC31-attP整合酶介導的基因重組方法及在鏈霉菌中應用在權利要求書中公布了:1.一種利用VWB-attP整合酶介導的林可鏈霉菌基因重組方法,其特征在于,包括步驟: 1在林可鏈霉菌出發菌株StreptomyceslincolnensisNRRL2936的基因組CysteateNRPS基因簇中引入外源的VWB整合酶所識別的attB位點,取代該基因簇的原SLINC0744基因,所述外源的VWB整合酶所識別的attB位點序列如SEQIDNO:5所示; 其中所述林可鏈霉菌的基因組中包含選自下組的內源的attB位點: a位于林可鏈霉菌SLINC_t29的VWB整合酶所識別的attB位點1’,其序列如SEQIDNO:5所示; b位于林可鏈霉菌SLINC_3666與SLINC_3667間隔區的VWB整合酶所識別的attB位點2’,其序列如SEQIDNO:6所示;和 c位于林可鏈霉菌SLINC_3671與SLINC_3672間隔區的VWB整合酶所識別的attB位點3’,其序列如SEQIDNO:7所示; 2將包含iVWB整合酶模塊、和ii目的基因或目的基因簇的載體引入到步驟1的林可鏈霉菌中,選擇目標基因或目標基因簇整合到鏈霉菌基因組內源attB位點以及外源attB位點的鏈霉菌,從而獲得整合入多拷貝基因或基因簇的鏈霉菌, 其中,所述的內源attB位點為位于林可鏈霉菌的VWB整合酶所識別的內源的attB位點1’; 并且所述的目的基因簇為林可霉素生物合成基因簇。
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