上海銳康生物技術研發有限公司林桂虹獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉上海銳康生物技術研發有限公司申請的專利一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN118360225B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202410308209.8,技術領域涉及:C12N1/21;該發明授權一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌是由林桂虹;周雷;謝榮;趙瑜瑜設計研發完成,并于2024-03-18向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌在說明書摘要公布了:本發明屬于生物工程發酵技術領域,具體涉及一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌。本發明的基因工程菌包含3?脫氧?7磷酸庚酮酸合成酶基因aroG、3?脫氫莽草酸脫水酶基因quiC以及4?羥基苯甲酸單加氧酶基因pobA的重組假單胞菌。該基因工程菌能夠通過發酵高效生產沒食子酸,具有產量高、傳代穩定、發酵工藝簡單、成本低、耐受性好等優點,適宜于工業放大生產,具有很好的應用前景。
本發明授權一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌在權利要求書中公布了:1.一種生物合成沒食子酸的重組基因工程菌,其特征在于:它是以假單胞菌PseudomonasputidaKT2440為生產宿主,包含3-脫氧-7磷酸庚酮酸合成酶基因aroG、3-脫氫莽草酸脫水酶基因quiC以及4-羥基苯甲酸單加氧酶基因pobA的重組假單胞菌; 所述重組假單胞菌采用兩步同源重組得到,所述兩步同源重組中: 構建包含3-脫氧-7磷酸庚酮酸合成酶基因aroG、3-脫氫莽草酸脫水酶基因quiC以及4-羥基苯甲酸單加氧酶基因pobA的重組質粒pBBR1-MCS2,所述重組質粒pBBR1-MCS2的啟動子為Prpsj12,所述啟動子Prpsj12的核苷酸序列如SEQIDNO.22所示; 將開放閱讀框和位點同源臂構建在質粒pk18mobsacB上,通過電轉化方式轉入至假單胞菌,并通過兩步同源重組篩選獲得所述重組假單胞菌; 所述3-脫氧-7-磷酸庚酮酸合成酶基因aroG的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述3-脫氫莽草酸脫水酶基因quiC的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,所述4-羥基苯甲酸單加氧酶基因pobA的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示; 所述重組假單胞菌不含有原兒茶酸3,4-雙加氧酶基因pcaGH,不含有丙酮酸激酶基因pykA、丙酮酸激酶基因pyk,不含有沒食子酸雙加氧酶基因galA、沒食子酸轉運蛋白基因基因galP、沒食子酸轉運蛋白基因基因galT,不含有葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP3382-PP3384、葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP3623、葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP4232、DNA轉錄阻遏因子基因hexR; 所述丙酮酸激酶基因pyk的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示,所述葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP3382-PP3384的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示,所述葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP3623的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示,所述葡萄糖酸-2-脫氫酶基因PP4232的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示; 所述重組假單胞菌還包含轉酮酶基因tktA、轉醛醇酶基因tal和磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因ppsA; 所述轉酮酶基因tktA的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示,所述轉醛醇酶基因tal的核苷酸序列如SEQIDNO.20所示,所述磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因ppsA的核苷酸序列如SEQIDNO.21所示。
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