中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院周一鳴獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院申請的專利一種高通量人腎臟類器官誘導分化方法獲國家發(fā)明授權專利權,本發(fā)明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115466728B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發(fā)布的發(fā)明授權授權公告中獲悉:該發(fā)明授權的專利申請?zhí)?專利號為:202210969848.X,技術領域涉及:C12N5/10;該發(fā)明授權一種高通量人腎臟類器官誘導分化方法是由周一鳴;楊小強;汪樂設計研發(fā)完成,并于2022-08-12向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種高通量人腎臟類器官誘導分化方法在說明書摘要公布了:本發(fā)明公開了一種高通量人腎臟類器官誘導分化方法,包括:向人誘導多能干細胞中加入ROCK通路抑制劑處理18~24h;更換為GSK?3抑制劑處理1~4天;更換為含有GSK?3抑制劑、FGF?9和Heparin的培養(yǎng)基B處理1~3天;進行高通量3D培養(yǎng),高效得到大量類器官球體;使用GSK?3抑制劑處理后,使用含有FGF?9和Heparin的培養(yǎng)基B培養(yǎng)1~6天;更換為無添加的培養(yǎng)基B培養(yǎng)1~10天,得到成熟的腎臟類器官。該方法操作簡單,針對性強,提高了誘導分化的效率和分化穩(wěn)定性,降低了分化成熟所需時間,增加了腎臟類器官的增殖效率,解決了常規(guī)方法中分化效率參差不齊,操作冗雜的問題。
本發(fā)明授權一種高通量人腎臟類器官誘導分化方法在權利要求書中公布了:1.一種人腎臟類器官誘導分化方法,其特征在于,包括如下步驟: 1向人誘導多能干細胞中加入含有ROCK通路抑制劑的培養(yǎng)基A處理18~24h;所述培養(yǎng)基A為mTeSR1培養(yǎng)基; 2更換為含有GSK-3抑制劑的培養(yǎng)基B處理1~4天; 3更換為含有GSK-3抑制劑、FGF-9和Heparin的培養(yǎng)基B處理1~3天;所述培養(yǎng)基B為STEMdiffAPEL2培養(yǎng)基; 4消化細胞得到細胞懸液,進行3D培養(yǎng),得到類器官球體; 5使用含有GSK-3抑制劑的培養(yǎng)基B處理50~70min,轉移至培養(yǎng)器中使用含有FGF-9和Heparin的培養(yǎng)基B培養(yǎng)1~6天; 6更換為無添加的培養(yǎng)基B培養(yǎng)1~10天,得到成熟的腎臟類器官; 所述ROCK通路抑制劑為Y-27632; 所述GSK-3抑制劑為CHIR99021; 1中細胞的接種量為0.6×105細胞9~10cm2; 1中所述人誘導多能干細胞為人尿源誘導多能干細胞; 4中所述3D培養(yǎng)的步驟為:使用v型96孔培養(yǎng)板對細胞進行培養(yǎng),并輔助機械刺激; 所述機械刺激的強度為50~150rpm,機械刺激的時間為20~50h; 5中所述培養(yǎng)器提前使用基質膠包被;包被時間為25~35min,包被溫度為35~37℃。
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