新加坡科技研究局王庭訓獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉新加坡科技研究局申請的專利測量核酸修飾酶活性的測定獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN114651067B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-22發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202080078223.3,技術領域涉及:C12N15/55;該發明授權測量核酸修飾酶活性的測定是由王庭訓;趙偉良設計研發完成,并于2020-10-15向國家知識產權局提交的專利申請。
本測量核酸修飾酶活性的測定在說明書摘要公布了:本申請公開了一種測量核酸修飾酶活性并篩選酶促反應的一個或多個可變元件的多重化方法。該方法包括:i提供編碼DNARNA靶位點和待測試的可變元件例如核酸修飾酶變體的多核苷酸構建體文庫,ii將多核苷酸構建體的單拷貝與體外轉錄翻譯IVVT試劑一起分區,iii允許在每個隔室中表達核酸修飾酶和DNARNA靶位點的IVVT反應,iv取決于編碼的核酸修飾酶的功能性,單個多核苷酸構建體RNA靶標被裂解、保持完整或以其他方式被修飾,和v通過測序對裂解的、完整的或修飾的多核苷酸構建體RNA靶標定量,從而直接鑒定與每個可變元件相關的酶活性并對該酶活性定量。特別地,核酸修飾酶是CRISPR相關蛋白Cas。
本發明授權測量核酸修飾酶活性的測定在權利要求書中公布了:1.一種用于測量核酸修飾酶的活性的方法,包括以下步驟: a將多個多核苷酸構建體分隔到隔室中,其中每個隔室包含單個多核苷酸構建體,其中每個多核苷酸構建體包含 i可操作地連接至第一啟動子的編碼核酸修飾酶或其變體的第一多核苷酸序列;和 ii包含DNA靶標或編碼RNA靶標的DNA模板的第二多核苷酸序列,其中當所述第二多核苷酸序列包含編碼RNA靶標的DNA模板時,所述RNA靶標與所述核酸修飾酶作為單個RNA轉錄物被所述第一啟動子驅動而連續共表達; 并且其中所述多個多核苷酸構建體編碼所述核酸修飾酶的不同變體,和或不同的DNA或RNA靶標; b使所述隔室經受允許RNA和蛋白質的體外表達的條件; c使多個所述隔室經受允許通過對DNA或RNA靶標具有修飾活性的核酸修飾酶修飾所述DNARNA靶標的條件,從而產生包含以下中的一個或多個的DNARNA分子群體: i.已被所述核酸修飾酶修飾的多核苷酸構建體和或RNA轉錄物或其片段; ii.未被所述核酸修飾酶修飾的多核苷酸構建體和或RNA轉錄物; d收獲步驟c中產生的所述DNARNA分子群體,并對其進行單分子測序; e基于測序結果對步驟ci和cii中提到的DNARNA分子進行檢測和計數。
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