漢諾生物科技(蘇州)有限公司黃才嶺獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉漢諾生物科技(蘇州)有限公司申請的專利一種糖蛋白N-連接糖類型的鑒定和驗證方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116242902B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-22發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310098001.3,技術領域涉及:G01N27/62;該發明授權一種糖蛋白N-連接糖類型的鑒定和驗證方法是由黃才嶺設計研發完成,并于2023-02-10向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種糖蛋白N-連接糖類型的鑒定和驗證方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種糖蛋白N?連接糖類型的鑒定和驗證方法,包括如下步驟:制備完整N?糖肽樣本;完整N?糖肽樣本經電噴霧電離后得到前體離子,前體離子經氣相解離得到碎片離子,對前體離子和碎片離子進行質譜分析;基于分子組成指紋比對的N?連接糖單糖組成、潛在序列結構和類型的鑒定;基于N?連接糖類型特征碎片離子的類型的篩選和確認;基于靶向?誘餌庫搜索的完整N?糖肽鑒定的假陽性控制;N?連接糖類型的鑒定和確認。該方法基于分子組成和結構指紋對糖蛋白上N?連接糖的類型進行鑒定和確認,有效控制了相同分子組成但不同類型的N?連接糖的區分和確認,在現有譜圖水平假陽性控制的基礎上增加了基于結構指紋的確認步驟,提高了N?連接糖類型鑒定準確度。
本發明授權一種糖蛋白N-連接糖類型的鑒定和驗證方法在權利要求書中公布了:1.一種糖蛋白N-連接糖類型的鑒定和驗證方法,其特征在于,包括如下步驟: S1、從待解析生物樣本中制備完整N-糖肽樣本; S2、完整N-糖肽樣本經電噴霧電離后得到前體離子,將前體離子送入質譜儀,得到包含前體離子同位素輪廓指紋的實驗一級質譜圖; S3、將前體離子的同位素輪廓指紋與對應的靶向正向理論數據庫進行匹配,篩選出符合匹配條件的具有相同分子組成的單糖組成; S4、將前體離子送入離子阱中進行氣相解離得到碎片離子,將碎片離子送入質譜儀,得到包含碎片離子同位素輪廓指紋的二級質譜圖; S5、對相同單糖組成不同序列結構的N-連接糖的實驗和理論碎片離子的分子組成指紋進行逐一同位素輪廓指紋比對; S6、自分子組成指紋相同但類型不同的N-連接糖中靶向地篩選和驗證各自的特征碎片離子,即高甘露糖型和雜合型N-連接糖包含GlcNAc2Man4序列結構診斷碎片離子,復雜型N-連接糖不包含該特定的碎片離子; S7、對經過序列結構特征診斷碎片離子篩選的N-連接糖的二級質譜的匹配進行隨機匹配概率打分,最后將符合預先設定的完整N-糖肽譜圖匹配條件的歸結為靶向GPSMs; S8、在誘餌庫中按照S3-S7的步驟,獲得誘餌GPSMs; S9、將靶向GPSMs和誘餌GPSMs組合,并按Pscore從小到大排序,選取一個閾值Pscore,使得假陽性不大于1%,對閾值Pscore以下的靶向GPSMs去重,獲得完整N-糖肽IDs。
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