復旦大學任煜軒獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉復旦大學申請的專利一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115078326B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-19發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210658622.8,技術領域涉及:G01N21/65;該發明授權一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置是由任煜軒;孔慈航;李博設計研發完成,并于2022-06-11向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置在說明書摘要公布了:本發明屬于單細胞化學成像技術領域,具體為一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置。本發明裝置包括激光光鑷光路、拉曼成像光路以及顯微鏡等;光鑷光路將激光通過二向色鏡耦合到顯微鏡物鏡實現強聚焦而形成強的梯度力光阱;拉曼光路包含時域同步、空間重合的兩路脈沖光,兩路脈沖激光經掃描振鏡掃描后由光路系統耦合到顯微鏡實現光束在樣品上的二維掃描;光鑷采用位置敏感探測器實現細胞等樣品位置的實時記錄,拉曼成像采用光電倍增管或光電探測器經鎖相放大后輸出。共定位的拉曼光源通過掃描可實現樣品多種組分的化學成像。所發明的裝置可用來對細胞中多種化學成分進行拉曼共定位成像,在細胞組分分析和組分分布測量等領域具有重要的應用。
本發明授權一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置在權利要求書中公布了:1.一種結合光鑷的受激拉曼顯微成像裝置,其特征在于,包括激光光鑷部分、拉曼顯微鏡部分以及兩者的耦合;用于做受激拉曼成像,或者做相干反斯托克斯成像,或者同時做兩種模式的成像;其中: 所述激光光鑷部分,包括依次光路連接的光鑷激光、顯微鏡物鏡、微流道樣品池、搜集物鏡、成像管鏡、位置敏感探測器以及必要的透鏡和反射鏡;由高數值孔徑的顯微鏡物鏡將激光束聚焦到衍射極限大小,具體為200-500nm;在光斑附近的微米納米粒子因光強梯度力的作用被吸引到光鑷中; 所述光鑷采用近紅外激光對細胞生物粒子進行無接觸、無損傷捕獲,并對細胞進行無接觸的固定,為細胞實現較長時間掃描成像提供穩定的位置固定; 所述拉曼顯微鏡部分,包括依次光路連接的兩個脈沖激光、掃描轉鏡、掃描透鏡、成像透鏡、顯微鏡物鏡、搜集透鏡、成像管鏡、濾波片、光電倍增管以及鎖相放大器;兩個脈沖激光在時域上以及空間上同步; 所述拉曼顯微鏡通過泵浦光和斯托克斯光與樣品的相互作用實現共振拉曼成像或者相干反斯托克斯成像;通過調節光電倍增管前的濾波片的透過率波段,實現共振拉曼成像和相干反斯托克斯成像的切換,或者設計雙通道分別實現受激拉曼成像和相干反斯托克斯成像; 所述的激光光鑷和拉曼成像的耦合,采用雙色鏡將光鑷激光和拉曼激發光耦合到顯微鏡系統;再采用雙色鏡將光鑷激光和拉曼信號光在空間上分開,拉曼信號包括受激拉曼散射或者相干反斯托克斯散射光; 所述的激光光鑷,采用與拉曼顯微鏡激發光與發射光光譜不重疊的激光實現;光鑷的中心波長是比斯托克斯譜線更長的波長,或者比反斯托克斯譜線更短的波長,或者是介于斯托克斯或反斯托克斯譜線與拉曼激發光之間的任何波長; 拉曼顯微鏡部分中的掃描轉鏡、掃描透鏡、成像透鏡、顯微鏡物鏡組成掃描單元;由掃描振鏡對共軸的拉曼泵浦光源和探測光進行二維角度掃描,再經掃描透鏡、成像透鏡、顯微鏡物鏡后,對空間上重合的兩個光斑在樣品上實現二維掃描;由于泵浦光和探測光在空間上重疊,因而在掃描過程中,能夠在樣品空間上重疊;同時在其中一條光路引出延遲調制單元,確保兩個脈沖序列在樣品上實現時間同步;時間和空間的同時同步為激發拉曼信號提供可能; 所述的拉曼成像通過掃描單元對兩個空間上重合的激光束進行掃描,并經過激發樣品后由光電倍增管搜集到受激拉曼散射或相干反斯托克斯信號后,再由計算機重構的二維圖像; 光鑷部分和拉曼顯微鏡分別設有各自的探測單元; 光鑷部分的位置敏感探測器作為探測單元,并結合后焦面干涉法,對光鑷中捕獲的粒子的位置進行高精度的探測;由于直接探測捕獲激光的信號,引入中性密度衰減片對激光功率進行適當調整; 拉曼顯微鏡部分的以光電倍增管作為探測單元,對拉曼信號進行探測;由于拉曼信號的強度比較弱,需要結合鎖相放大器對信號進行放大;為實現鎖相放大,需要對拉曼激發光的強度進行調制,這里的調制信號將做為鎖相放大的參考輸入;光電倍增管的信號只有頻率與拉曼激發光調制頻率一致的信號被放大輸出。
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