大連理工大學趙慧敏獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉大連理工大學申請的專利一種基于連續變色銀納米簇信號放大同時檢測兩種ARGs的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116334203B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-19發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310137057.5,技術領域涉及:C12Q1/6876;該發明授權一種基于連續變色銀納米簇信號放大同時檢測兩種ARGs的方法是由趙慧敏;陳娜紅設計研發完成,并于2023-02-20向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于連續變色銀納米簇信號放大同時檢測兩種ARGs的方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種基于連續變色銀納米簇信號放大同時檢測兩種ARGs的方法,屬于分析檢測技術領域。本發明檢測方法所用的探針包括探針DNA銀納米簇H1?AgNCs和探針增強序列H2,其中,H1?AgNCs的兩端分別穩定了不同弱熒光發射的銀納米簇,增強序列H2的兩端則分別富含G和T序列。目標基因和兩條探針序列交替連接,變色銀納米簇靠近富GT序列,調諧和放大熒光信號。本發明通過設計兩條DNA鏈即可實現兩種ARGs的無酶、簡便、高特異性同時檢測,同時,由目標基因連接的含有連續變色銀納米簇信標的線性DNA結構實現了兩種熒光信號的轉導和放大,可廣泛用于各種環境水體樣本中抗生素抗性基因的快速篩查或定量檢測。
本發明授權一種基于連續變色銀納米簇信號放大同時檢測兩種ARGs的方法在權利要求書中公布了:1.一種基于變色銀納米簇的ARGs檢測方法,其特征在于,所述的檢測方法為非疾病的治療與診斷方法,包括如下步驟:將熒光探針DNA銀納米簇H1-AgNCs與增強探針H2按照摩爾比1:2~2:1添加至緩沖液中,然后加入含有目標基因ARGs的待測樣品,混合均勻后進行反應,利用熒光分光光度計檢測熒光強度; 所述的目標基因ARGs為tet-A和sul-1中的一種或兩種,tet-A的核酸序列: 5’-GGACAACATTGCTTGCAGCGCCGGCATTCCGA-3’; sul-1的核酸序列為: 5′-AAGAGCGGCGCAATACGTCTGATCTCATCGGC-3′; 所述的熒光探針DNA銀納米簇H1-AgNCs的核苷酸序列為: 5’-CCTCCTTCCTCCTTTGTATTGCGCCGCTCTTTCGGAATGCCGGCGCTTATCCCTTAATCCCC-3’; 所述增強探針H2的核苷酸序列為: 5’-TTTTTTTTTTTTATAGCAAGCAATGTTGTCCGCCGATGAGATCAGACAAAGGGTGGGGTGGGGTGGGG-3’; 反應溫度為4~50℃,反應時間為5~75min; 熒光分光光度計參數設定:激發波長:495nm和580nm,發射波長范圍為:520~650nm和600~720nm,激發狹縫和發射狹縫為10nm,掃描電壓為700V; 檢測目標基因tet-A時,綠色熒光被點亮,所述熒光反應體系的pH為3.6~5.0;檢測目標基因sul-1時,紅色熒光被增強,所述熒光反應體系的pH為5.6~7.0;兩種目標基因同時檢測是在pH4.4的Tris-HAc緩沖液中進行。
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