湖南農業大學向建國獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉湖南農業大學申請的專利一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑及其制備方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119753093B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510063985.0,技術領域涉及:C12Q1/6806;該發明授權一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑及其制備方法是由向建國;張廖瑞林;廖小林;李鴻;李德亮;黃艷飛;劉新華;龔宇舟;張健;張恬諭;張家諾;李娟;何進榮;李湘設計研發完成,并于2025-01-15向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑及其制備方法在說明書摘要公布了:本發明涉及生物技術領域,具體涉及一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑及其制備方法,本發明提供的棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑由裂解液60?70份、蛋白酶混合液8?12份、去雜劑10?15份、DNA沉淀劑6?9份、洗滌液10?15份組成,各成分經特定步驟制備,采用該試劑提取DNA,通過樣本預處理、裂解、去雜、沉淀、洗滌、溶解等步驟,能有效去除雜質,提高DNA純度、濃度和完整性,PCR擴增效果良好,產物條帶單一清晰無引物二聚體和非特異性擴增,大幅提升了棘胸蛙InDel分子標記檢測的準確性與可靠性,推動了棘胸蛙分子遺傳學研究及相關產業發展。
本發明授權一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑及其制備方法在權利要求書中公布了:1.一種棘胸蛙InDel分子標記用樣本DNA提取試劑,其特征在于,由以下質量份原料制備得到:裂解液60-70份、蛋白酶混合液8-12份、去雜劑10-15份、DNA沉淀劑6-9份、洗滌液10-15份; 所述裂解液包括以下質量份原料:Tris-HCl、NaCl、EDTA、異硫氰酸胍、蛋白酶改性異硫氰酸胍、十六烷基三甲基溴化銨和聚乙烯吡咯烷酮; 所述裂解液中Tris-HCl、NaCl、EDTA、異硫氰酸胍、蛋白酶改性異硫氰酸胍、十六烷基三甲基溴化銨和聚乙烯吡咯烷酮的質量比為18-20:25-28:8-10:26-32:5-8:14-16:6-10; 所述Tris-HCl的pH為8-8.5,所述EDTA的pH為7.8-8.3; 所述蛋白酶改性異硫氰酸胍的制備過程如下: 步驟A1.溶液配制:將異硫氰酸胍溶解在緩沖液中,配制成3-5molL的異硫氰酸胍溶液,將木瓜蛋白酶用緩沖液稀釋至6-10mgmL,得到木瓜蛋白酶溶液; 步驟A2.將異硫氰酸胍溶液和木瓜蛋白酶溶液混合在反應容器中,加入緩沖液,將反應容器置于55-65℃環境中于300-500rpm轉速下攪拌8-10h; 步驟A3.反應結束后,將反應體系加熱至80-90℃,保持20-30min,于10000-12000rpm的轉速下離心20-25min,收集上清液,得到蛋白酶改性異硫氰酸胍; 步驟A1中所述異硫氰酸胍為分析純級別異硫氰酸胍; 步驟A1中所述木瓜蛋白酶的酶活單位為7500-8500Ug; 步驟A1中所述緩沖液為pH為6-7的Tris-HCl緩沖液; 步驟A2中所述異硫氰酸胍溶液和木瓜蛋白酶溶液中異硫氰酸胍和木瓜蛋白酶的質量比為40-50:1-3; 步驟A2中所述緩沖液為pH為6-7的Tris-HCl緩沖液。
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