浙江大學張奇春獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉浙江大學申請的專利氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN115046820B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-05發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210561194.7,技術領域涉及:G01N1/28;該發明授權氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法是由張奇春;鞏龍達;牛天新設計研發完成,并于2022-05-23向國家知識產權局提交的專利申請。
本氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法,包括以下步驟:步驟一、設定硝化潛勢的測定方式;步驟二、三種微生物的區分:為了將三種硝化功能微生物——氨氧化古菌AOA、氨氧化細菌AOB和完全硝化菌comammox的貢獻區分開,通過對多抑制劑法進行改進從而將其區分開;從而測定不同土壤懸液的采樣時間點下的NO2 ?含量NO3 ?含量;步驟三、計算土壤的硝化潛勢。采用本發明的方法準確測量氨氧化古菌、氨氧化細菌和完全硝化菌對土壤硝化貢獻。
本發明授權氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法在權利要求書中公布了:1.氨氧化微生物對土壤硝化貢獻的測量方法,其特征在于包括以下步驟: 步驟一、設定硝化潛勢的測定方式: 將待測土壤制備成土壤懸液,搖床培養24h; 設置六個取樣時間點; 每個取樣時間均分別進行如下操作:吸取5ml培養后土壤懸液,與5mlKCl溶液混合后震蕩,而后離心,上清液過0.25mm濾膜后測定NO2 -和NO3 -含量; 步驟二、三種微生物的區分: 1、向10g待測土壤中加入100ml的磷酸鹽緩沖液再添加NaClO3至其終濃度為10mM;得添加NaClO3的土壤懸液,命名為土壤懸液Ⅰ; 將土壤懸液Ⅰ按照步驟一的測定方式測定六個采樣時間點下的NO2 -含量,獲得NO2 -的濃度與采樣時間對應的線性回歸方程式,得到斜率RAOA+AOB; 將土壤懸液Ⅰ按照步驟一的測定方式測定六個采樣時間點下的NO3 -含量,獲得NO3 -的濃度與采樣時間對應的線性回歸方程式,得到斜率RcomammoxⅠ; 2、包括以下2個步驟: 2.1、按照每g土壤添加12.5mg的辛伐他汀的用量比,在土壤懸液Ⅰ中加入辛伐他汀,所得命名為辛伐他汀土壤懸液; 將辛伐他汀土壤懸液按照步驟一的測定方式測定六個采樣時間點下的NO2 -含量,獲得NO2 -的濃度與采樣時間對應的線性回歸方程式,得到斜率RAOB; 2.2、在土壤懸液Ⅰ中加入DMPP至DMPP的濃度應為0.075mM;所得命名為DMPP土壤懸液; 將DMPP土壤懸液按照步驟一的測定方式測定六個采樣時間點下的NO2 -含量,獲得NO2 -的濃度與采樣時間對應的線性回歸方程式,得到斜率RAOA; 3、在土壤懸液Ⅰ中同時加入辛伐他汀和DMPP,至DMPP的濃度應為0.075mM,每g土壤添加12.5mg的辛伐他汀;所得命名為辛伐他汀+DMPP土壤懸液; 將辛伐他汀+DMPP土壤懸液按照步驟一的測定方式測定六個采樣時間點下的NO3 -含量,得NO3 -的濃度與采樣時間對應的線性回歸方程式,得到斜率RcomammoxⅡ; 步驟三、計算土壤的硝化潛勢。
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