河南大學畢洪論獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉河南大學申請的專利一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因Yellow Protein純合突變體的方法及其應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN118000165B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-05發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202410347601.3,技術領域涉及:C12N15/113;該發明授權一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因Yellow Protein純合突變體的方法及其應用是由畢洪論;周樹堂;任行;蔣春冉;連杰涵設計研發完成,并于2024-03-26向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因Yellow Protein純合突變體的方法及其應用在說明書摘要公布了:本發明屬于基因工程技術領域,涉及病蟲害防治,特別是指一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因YellowProtein純合突變體的方法及其應用。本發明以飛蝗YP基因的序列鑒定和功能研究為目的,利用飛蝗基因組序列和RACE技術,克隆了飛蝗YP基因全長序列,表達譜鑒定了YP基因在成蟲頭部、表皮、背板特異性高表達,對飛蝗YP基因進行了敲除,通過篩選構建了飛蝗YP純合突變體。當突變體羽化至成蟲后,發現雄蟲相較于野生型體色沒有出現變黃的現象,生測發現雄蟲在求偶交配行為方面表現在求偶欲望下降,拒絕交配等表型。進一步確認了YP純合體中YP基因功能缺失。YP純合體的構建為其他飛蝗的研究提供了表型明顯的Marker基因和基因功能的研究思路,同時也為飛蝗的綠色防控提供理論基礎和應用潛力。
本發明授權一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因Yellow Protein純合突變體的方法及其應用在權利要求書中公布了:1.一種構建飛蝗雄蟲體色Marker基因YellowProtein純合突變體的方法,其特征在于,包括以下步驟: (1)在飛蝗YellowProtein基因的2號外顯子和5號外顯子上各設計一個sgRNA靶標位點,通過體外轉錄合成sgRNA; (2)步驟(1)的sgRNA與Cas9蛋白體外融合形成RNP混合物,經顯微注射注入飛蝗卵,獲得飛蝗突變體; (3)提取步驟(2)的飛蝗突變體基因組后,利用靶點檢測引物進行PCR檢測,并對PCR產物進行測序,篩選突變檢測成功的飛蝗突變體作為G0代突變體; (4)G0代突變體與野生型個體進行雜交得G1代,重復步驟(3)的檢測,篩選得到G1代突變體;G1代突變體與野生型個體進行雜交得G2代,重復步驟(3)的檢測,篩選得到G2代突變體; (5)G2代突變體經突變檢測成功后,將雌雄突變類型一致的G2代突變體進行自交,得到G3代個體,篩選G3代個體中的純合突變體經自交后獲得飛蝗YellowProtein純合突變體種群; 所述步驟(1)中飛蝗YellowProtein基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。
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