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龍圖騰網(wǎng)獲悉信立泰(蘇州)藥業(yè)有限公司申請的專利一種重組特立帕肽生物學(xué)活性測定方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN118667915B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-26發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202311844442.X，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12Q1/02；該發(fā)明授權(quán)一種重組特立帕肽生物學(xué)活性測定方法是由王敏;李艷;盧志新設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2023-12-29向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種重組特立帕肽生物學(xué)活性測定方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種檢測重組特立帕肽生物學(xué)活性的方法。具體地，選用大鼠骨肉瘤UMR?106細(xì)胞作為檢測細(xì)胞，通過測定所述細(xì)胞在重組特立帕肽作用下的cAMP水平來反映其生物學(xué)活性。本發(fā)明建立的方法曲線擬合度高，準(zhǔn)確度好，重復(fù)性高，耐用性強(qiáng)，能夠很好的適用于重組特立帕肽生物學(xué)活性的檢測。

本發(fā)明授權(quán)一種重組特立帕肽生物學(xué)活性測定方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種重組特立帕肽生物學(xué)活性的檢測方法，其包括以下步驟： 1取對數(shù)生長期生長狀態(tài)良好的UMR-106細(xì)胞，用培養(yǎng)基制備成2.0×105cellsml的細(xì)胞懸液，100μl孔鋪至細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)20h； 2用樣品稀釋液倍比稀釋重組特立帕肽參考品和供試品，供試品為重組特立帕肽注射液，所述注射液由重組特立帕肽原液、冰醋酸、無水醋酸鈉、甘露醇、間甲酚、鹽酸、氫氧化鈉、注射用水組成，所述樣品稀釋液由磷酸鹽緩沖液和1mmolL的3-異丁基-1-甲基黃嘌呤組成，所述重組特立帕肽參考品和供試品的起始濃度為0.5μgml，稀釋倍數(shù)為3.5，共9個(gè)濃度梯度； 3將步驟2各濃度梯度的參考品和供試品分別以100μl孔加入所述細(xì)胞培養(yǎng)板，與所述細(xì)胞孵育15min； 4孵育完成后，棄上清，用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液清洗細(xì)胞； 5以150μl孔加入細(xì)胞裂解液，先后放置于≤-70℃以及37℃凍融一次，所述細(xì)胞裂解液由5mMTris和1％SDS組成，所述Tris的pH為7.5；檢測cAMP含量，計(jì)算生物學(xué)活性； 所述細(xì)胞的匯合度控制在80％～90％之間，所述細(xì)胞懸液的細(xì)胞活率≥90％； 所述檢測cAMP含量包括通過競爭ELISA法檢測cAMP含量，在酶標(biāo)板上包被cAMP抗體，加入細(xì)胞裂解物，再加入帶辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記的cAMP，顯色然后終止，測定450nm處的OD值； 以供試品或參考品的濃度對應(yīng)的稀釋倍數(shù)為X軸，以其對應(yīng)的OD值為Y軸，擬合四參數(shù)方程曲線，計(jì)算半效稀釋倍數(shù)EC50； 所述四參數(shù)方程如下： y＝A2+A1-A21+xX0p x：供試品或參考品的濃度對應(yīng)的稀釋倍數(shù)； y：OD值； A1：x趨近于無窮小時(shí)，y的最小值； A2：x趨近于無窮大時(shí)，y的最大值； p：四參數(shù)曲線的斜率； X0：半效稀釋倍數(shù)EC50； 供試品的相對生物學(xué)活性＝供試品EC50參考品EC50×100％。

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