南京燦辰微生物科技有限公司丁昊天獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉南京燦辰微生物科技有限公司申請的專利一種檢測細菌菌株耐藥酶基因的引物組及分型檢測方法及試劑盒獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN118581243B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202410758303.3,技術領域涉及:C12Q1/689;該發明授權一種檢測細菌菌株耐藥酶基因的引物組及分型檢測方法及試劑盒是由丁昊天;汪輝;劉聰設計研發完成,并于2024-06-13向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種檢測細菌菌株耐藥酶基因的引物組及分型檢測方法及試劑盒在說明書摘要公布了:本發明屬于微生物學和遺傳學技術領域,尤其涉及一種檢測細菌菌株耐藥酶基因的引物組及分型檢測方法及試劑盒,所述引物組為耐β?內酰胺酶基因和耐碳青霉烯酶基因的擴增引物,所述耐β?內酰胺酶基因包括SHV、TEM、CTX?M,所述耐碳青霉烯酶基因包括NDM、OXA?23、KPC。根據特定的酶分型引物進行PCR擴增,采用磁珠法提取基因組DNA,以提高DNA提取的效率和純度,從而優化PCR的準確性和效率,通過瓊脂糖凝膠電泳和后續測序分析,與NCBI數據庫對比確認具體酶分型結果。簡化了實驗流程,降低了成本,并為新型β?內酰胺酶和碳青霉烯酶抑制劑的篩選及臨床用藥提供科學依據,具有高效、準確和成本效益高的優點。
本發明授權一種檢測細菌菌株耐藥酶基因的引物組及分型檢測方法及試劑盒在權利要求書中公布了:1.一種非診斷目的的細菌菌株耐藥酶基因分型檢測方法,其特征在于,包括以下步驟: S1,利用磁珠試劑盒提取待檢測菌株基因組DNA; S2,將S1中提取的待檢測菌株DNA作為模板,利用引物組對該待檢測菌株的靶基因進行PCR擴增; S3,通過凝膠電泳,檢測S2中所得的擴增產物,進行耐藥基因檢測結果鑒定; S4,將S3中經過耐藥基因檢測后的擴增產物進行核酸序列測定; S5,將S4中的測定的6個靶基因的序列與對應靶基因的酶型標準序列進行序列比對分析,以確定具體的靶基因的基因分型; 所述引物組為SHV、TEM、CTX-M、NDM、OXA-23和KPC的擴增引物; 所述引物組的核苷酸序列如SEQIDNO.1~SEQIDNO.12所示; 所述磁珠試劑盒包括裂解液、磁珠、吸附緩沖液、洗滌液和洗脫液; 所述裂解液由終濃度0.1wt%SDS、終濃度0.5wt%Triton-100和終濃度0.5wt%β-巰基乙醇組成,pH為7; 所述吸附緩沖液由終濃度4molL的鹽酸胍、終濃度800mmolL氯化鈉、終濃度200mmolL檸檬酸鈉、終濃度1mmolLEDTA和終濃度75wt%異丙醇組成; 所述洗滌液為濃度70wt%的乙醇溶液; 所述洗脫液由終濃度10mmolLTris-HCl和終濃度1mmolLEDTA組成; 步驟S2中PCR擴增的程序如下: 95℃預變性3min,95℃變性15s,55℃退火1min,72℃延伸5min,進行30次循環,最后72℃延伸5min; 所述待檢測菌株選自大腸埃希菌、鮑曼不動桿菌、陰溝腸桿菌、肺炎克雷伯菌中至少一種。
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