江蘇創健醫療科技股份有限公司程鵬飛獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉江蘇創健醫療科技股份有限公司申請的專利一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119684437B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-12發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411937523.9,技術領域涉及:C07K14/78;該發明授權一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法是由程鵬飛;李佳佳;任喬;陳凱歌;錢松設計研發完成,并于2024-12-26向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法在說明書摘要公布了:本發明提供了一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法,屬于生物技術和純化分離技術領域;本發明所述基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法包括:預處理、pH調節、陰離子交換層析、反相聚合物填料層析、脫色和濃縮換液;本發明對發酵液進行離心和過濾處理,有效地去除了細胞碎片等大顆粒雜質,隨后對發酵液進行pH調節處理,為后續層析提供了最適的pH環境,陰離子交換層析和反相聚合物填料層析分別針對帶負電荷的雜質、極性弱的雜質以及部分游離色素進行了高效的去除,接著對結合在重組膠原蛋白內部的色素進行脫色處理,最后對脫色后的發酵液進行濃縮換液,從而得到高純度的重組膠原蛋白溶液。
本發明授權一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法在權利要求書中公布了:1.一種基于多層過濾的重組膠原蛋白分離純化方法,其特征在于,所述重組膠原蛋白分離純化方法包括: (1)調節預處理后的含有重組膠原蛋白的發酵液的pH值,然后將pH調節后的發酵液依次采用陰離子交換層析和反向聚合物填料層析處理,得到經過層析處理的發酵液;將預處理后的發酵液pH值調節至5.0~5.5; 所述陰離子交換層析單元為陰離子交換層析柱,所述陰離子交換層析柱中采用的陰離子交換介質包括DiamondCD-S; 所述反向聚合物填料層析單元為反相聚合物填料層析柱,所述反相聚合物填料層析柱中的反向聚合物填料為具有疏水性表面的聚合物微球; 所述具有疏水性表面的聚合物微球包括:疏水改性處理的PS-DVB共聚物微球; 所述疏水改性處理的PS-DVB共聚物微球的制備方法包括: S1.PS-DVB共聚物微球的制備: 向乳化后的乳化劑溶液中加入單體苯乙烯和交聯劑的混合物,然后進行乳化處理,處理結束后得到白色乳液,將白色乳液水浴加熱反應,反應過程中加入引發劑,反應結束后冷卻至室溫,得到PS-DVB共聚物微球; 所述乳化劑為十二烷基磺酸鈉,所述交聯劑為二乙烯基苯,所述引發劑為過氧化苯甲酰; S2.疏水改性處理的PS-DVB共聚物微球的制備: 向功能層聚合物溶液中加入交聯劑和引發劑,攪拌混合均勻后得到涂層溶液;所述功能層聚合物溶液中,功能層聚合物為聚乙二醇、聚乙烯醇或聚丙烯酸,溶劑為乙醇;所述交聯劑為二乙烯基苯;所述引發劑為過氧化苯甲酰; 將PS-DVB共聚物微球分散在涂層溶液中,超聲處理,處理結束后濾紙吸去多余的涂層溶液,然后進行固化處理,處理結束后洗滌,干燥,得到所述疏水改性處理的PS-DVB共聚物微球; (2)向經過層析處理的發酵液中添加L-半胱氨酸、辛酸鈉與EDTA,加熱脫色,得到脫色后的發酵液; (3)將脫色后的發酵液進行濃縮換液處理,處理結束后得到高純度的重組膠原蛋白溶液。
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