深圳海普洛斯醫學檢驗實驗室許明炎獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉深圳海普洛斯醫學檢驗實驗室申請的專利一種人免疫組庫測序的方法及試劑盒獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN114774517B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202210381164.8,技術領域涉及:C12Q1/6806;該發明授權一種人免疫組庫測序的方法及試劑盒是由許明炎;張曉妮;周書雄設計研發完成,并于2022-04-12向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種人免疫組庫測序的方法及試劑盒在說明書摘要公布了:本申請公開了一種人免疫組庫測序的方法及試劑盒。本申請方法包括,用第一引物對模板核酸進行一次延伸;第一引物包括平臺上游引物結合區、UMI和靶標上游引物序列,其部分T替換為dU;向反應體系加入第二引物進行一次延伸;第二引物包括平臺下游引物結合區和靶標下游引物序列;向反應體系加入UDGUNG酶消化dU;消化后向反應體系加入第三引物進行PCR;第三引物為第一引物平臺上游引物結合區序列;第一和第二引物的靶標序列為針對人TCR基因設計的特異性序列。本申請方法全覆蓋人免疫組庫TCR的CDR3,捕獲效率高;通過引物的特殊設計,依序向反應體系中加入三種引物,實現使每個原始模板核酸只對應一個UMI,校正每個靶點擴增性偏差,實現靶標基因拷貝數定量檢測。
本發明授權一種人免疫組庫測序的方法及試劑盒在權利要求書中公布了:1.一種人免疫組庫測序的方法,其特征在于:包括以下步驟, 配制反應體系,采用第一引物對模板核酸進行一次延伸,得到互補鏈;所述第一引物由5’端到3’端依序包括測序平臺上游引物結合區、唯一性標識符和靶標特異性上游引物序列;并且,所述第一引物中,測序平臺上游引物結合區和靶標特異性上游引物序列中的堿基T替換為脫氧尿嘧啶,所述測序平臺上游引物結合區對應測序平臺的上游測序引物的3’末端; 第一引物延伸結束后,向反應體系中加入第二引物,利用第二引物對第一引物延伸的互補鏈進行一次延伸,獲得由測序平臺上游引物結合區、唯一性標識符、靶標序列和測序平臺下游引物結合區組成的產物;所述第二引物由5’端到3’端依序包括測序平臺下游引物結合區和靶標特異性下游引物序列,所述測序平臺下游引物結合區對應測序平臺的下游測序引物的3’末端; 第二引物延伸結束后,向反應體系中加入UDGUNG酶消化脫氧尿嘧啶,從而消化第一引物以及第一引物的延伸鏈; UDGUNG酶消化完成后,向反應體系中加入第三引物,利用第三引物和第二引物對第二引物延伸的產物進行PCR擴增富集,獲得所述模板核酸的所有擴增子都添加相同唯一性標識符的產物;所述第三引物為第一引物的測序平臺上游引物結合區自5’端起的全部或部分序列,并且,第三引物中的堿基T不被替換為脫氧尿嘧啶; 對PCR擴增富集獲得的所有擴增子都添加相同唯一性標識符的產物進行測序文庫構建和測序,即完成人免疫組庫測序; 所述靶標特異性上游引物序列和所述靶標特異性下游引物序列為針對人T細胞受體編碼基因設計的全覆蓋其CDR3區域編碼基因序列的特異性引物序列; 所述第一引物由SeqIDNo.1至SeqIDNo.40所示序列的40條引物組成; 所述第二引物由SeqIDNo.41至SeqIDNo.52所示序列的12條引物組成; 所述第三引物為SeqIDNo.53所示序列。
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