寧波大學張冬雨獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉寧波大學申請的專利一種孔板式低場核磁共振/比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116593686B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310413737.5,技術領域涉及:G01N33/531;該發明授權一種孔板式低場核磁共振/比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法是由張冬雨;郭智勇;陳樂;郝婷婷;鄔楊波;謝建軍設計研發完成,并于2023-04-18向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種孔板式低場核磁共振/比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種孔板式低場核磁共振比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法,特點是包括以下步驟1信號單元MNS@Ab2的合成;2在96孔板壁上形成MNS@Ab2?VP?Ab1復合結構,每孔加入硫酸,再加入高錳酸鉀溶液,酶標儀測定吸光度進行比色分析;3將96孔板拆卸成單獨的小杯放入核磁測試管,使用IR脈沖序列測量法進行T1測量,ΔT1的值由以下公式計算:ΔT1=T1negative–T1positive,根據電流信號值計算獲得待測溶液中食源性致病菌濃度;優點是靈敏度高、特異性強、精確性好且操作簡單快速的。
本發明授權一種孔板式低場核磁共振/比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法在權利要求書中公布了:1.一種孔板式低場核磁共振比色法雙模式檢測食源性致病菌的方法,本方法不以診斷或治療為目的,其特征在于包括以下步驟: (1)信號單元MNS@Ab2的合成 將25mg1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC、10mgN-羥基琥珀酰亞胺NHS溶解在10mL0.5mgmL二維磁性納米片MNS分散液中,用0.01molL鹽酸調節pH=5.0,室溫下攪拌30min,加入100μL0.5mgmL食源性致病菌多克隆抗體Ab2,室溫下偶聯反應3h后,加入200μL2wt%牛血清白蛋白BSA溶液以封閉非特異性結合位點,磁力清洗后,所得沉淀物分散在10mLpH=7.4,0.1molL的PBS溶液中,即得到信號單元MNS@Ab2分散液,其中所述的二維磁性納米片的制備方法步驟如下:將540mgFeCl3·6H2O、200mg檸檬酸三鈉、7mL乙二醇和13mL二乙二醇混合,室溫攪拌30min溶解;然后加入2g乙酸鈉與25mg單層氧化石墨烯GO粉末,室溫攪拌30min,將混合物轉移至聚四氟乙烯反應釜內,在200℃下反應8h,將獲得的黑色沉淀用水和乙醇清洗,并置于真空干燥箱內60℃烘干,得到表面組裝有Fe3O4納米顆粒的氧化石墨烯GO,即二維磁性納米片; (2)比色法檢測 取潔凈的96孔板,每孔加入100μL2.0μgmL食源性致病菌多克隆抗體Ab1,4℃孵育10h后,用0.1molLPBS清洗三次以除去游離的Ab1;室溫下,采用250μL2wt%BSA封閉非特異性結合位點,最后用水清洗除去多余的BSA;每孔加入200μL待測樣品,室溫孵育30min,倒去剩余液體加入200μL0.5mgmL信號單元MNS@Ab2分散液;孵育30min后清洗三次除去未反應的MNS@Ab2;經過免疫反應,在96孔板壁上形成MNS@Ab2-VP-Ab1復合結構,每孔加入100μL3molL硫酸溶解Fe3O4納米粒子,再加入100μL0.25mmolL高錳酸鉀溶液,酶標儀測定吸光度進行比色分析,根據吸光度值與食源性致病菌濃度之間的定量關系即可測定未知樣品中食源性致病菌濃度; (3)低場核磁共振均相免疫檢測 將96孔板拆卸成單獨的小杯放入核磁測試管,在35℃下,使用IR脈沖序列測量法進行縱向馳豫時間T1測量,根據水質子的縱向馳豫時間差值與食源性致病菌濃度之間的定量關系即可測定未知樣品中食源性致病菌濃度,ΔT1的值由以下公式計算:ΔT1=T1negative–T1positive,其中,T1negative是無食源性致病菌時的平均T1,T1positive是有食源性致病菌時的平均T1。
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