上海海洋大學徐田軍獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉上海海洋大學申請的專利一種魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗及其制備方法和應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119770635B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510290007.X,技術領域涉及:A61K39/12;該發明授權一種魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗及其制備方法和應用是由徐田軍;孫悅娜;周學鋒;鄭偉偉;高云航設計研發完成,并于2025-03-12向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗及其制備方法和應用在說明書摘要公布了:本發明涉及生物醫藥技術領域,具體公開了一種魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗及其制備方法和應用。本發明中利用復制缺陷型重組腺病毒載體,制備病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗的方法,具體步驟包括神經壞死病毒CP基因克隆、構建帶有目的基因的Pshuttle?CMV?ECMV載體、獲得重組腺病毒質粒、篩選獲得重組腺病毒和制備重組腺病毒疫苗。本發明制備得到的魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗能夠通過浸泡方式在幼魚期進行免疫預防NNV病毒感染,疫苗穩定性好,且經動物安全性試驗證明疫苗安全、有效,臨床使用便利簡單,具有較好的市場應用前景。
本發明授權一種魚類病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗及其制備方法和應用在權利要求書中公布了:1.一種石斑魚病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗,其特征在于:所述重組腺病毒疫苗的抗原蛋白為病毒性神經壞死病毒CP基因,所述重組腺病毒疫苗的抗原的核苷酸序列為SEQIDNO:1所示,所述石斑魚病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗按照如下步驟制備: (1)神經壞死病毒CP基因克隆:針對病毒NNV-CP基因序列進行分析設計引物NNV-CP-F和引物NNV-CP-R以NNV病毒的cDNA為模板進行擴增,NNV-CP-F和引物NNV-CP-R分別加入了Pshuttle-CMV-ECMV載體的同源序列和酶切位點; (2)構建帶有NNV-CP的Pshuttle-CMV-ECMV載體:將克隆得到的NNV-CP基因,通過同源重組技術克隆到Pshuttle-CMV-ECMV載體,構建出帶有NNV-CP基因的Pshuttle-CMV-ECMV載體,命名為Pshuttle-CMV-ECMVNNV-CP; (3)獲得重組腺病毒質粒:將獲得的重組腺病毒載體Pshuttle-CMV-ECMVNNV-CP與PAd-easy-1載體在大腸桿菌BJ5183中進行同源重組,構建出重組腺病毒質粒; (4)篩選獲得重組腺病毒:將篩選得到的重組腺病毒陽性質粒經PacⅠ酶切后用于轉染HEK293細胞,獲得帶有NNV-CP基因的重組腺病毒; (5)制備病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗:將收獲的帶有NNV-CP基因的重組腺病毒傳代后,對目的抗原蛋白的表達進行檢測,將檢測后蛋白能夠表達的重組腺病毒接種于HEK293細胞進行多次傳代、反復凍融并測定病毒滴度,取高滴度的重組腺病毒制備得到病毒性神經壞死癥重組腺病毒疫苗。
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