中國科學院天津工業生物技術研究所田朝光獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中國科學院天津工業生物技術研究所申請的專利一種基于流式細胞術的免涂板操作的菌株工程改造的方法及應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116135979B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202111352181.0,技術領域涉及:C12N15/80;該發明授權一種基于流式細胞術的免涂板操作的菌株工程改造的方法及應用是由田朝光;王興吉;劉倩;楊玉凈;劉音;劉丹丹;郭文柱;孫濤;孫文良設計研發完成,并于2021-11-16向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于流式細胞術的免涂板操作的菌株工程改造的方法及應用在說明書摘要公布了:本發明構建了一種基于流式細胞術的免平板操作的菌株工程改造的方法,將將帶有選擇性標記基因的DNA序列的轉化進入目的真菌原生質體基因組中、流式細胞儀分選、深孔板培養、以及表型快速分析步驟結合起來。可直接用于絲狀真菌遺傳轉化后的原生質體的篩選和分離,解決了現有絲狀真菌技術中鋪平板培養、轉化子挑選、分生孢子制備以及搖瓶鑒定過程中耗時長、費力、通量低的瓶頸問題。本發明的方法操作方便、省時省力,極大提高絲狀真菌工程改造的效率,可便捷有效的進行高通量構建絲狀真菌高產工程菌。
本發明授權一種基于流式細胞術的免涂板操作的菌株工程改造的方法及應用在權利要求書中公布了:1.一種基于流式細胞術的免平板操作的絲狀真菌工程改造的方法,其特征在于,包括如下步驟: (1)將帶有篩選標記和目標DNA的序列轉化進入目的絲狀真菌原生質體基因組中;所述篩選標記為選擇性標記基因或者帶有營養缺陷型基因; (2)轉化后獲得的原生質體在含相應于所述選擇性標記基因的選擇性物質的培養液中進行再生和萌發培養,所述再生和萌發培養是指培養8-16小時,獲得用于后續篩選的短菌絲形態的轉化子,且所述短菌絲形態是指不超過70μm的短菌絲體; (3)利用流式細胞儀檢測步驟(2)獲得的轉化子直接分選至深孔板中進行發酵培養,所述深孔板是具有高通量篩選作用的培養器皿; (4)分析檢測步驟(3)中分選到深孔板發酵培養的轉化子,離心后取出深孔板中上清液進行蛋白測定,比較分泌目標蛋白的相對高低,得到基因工程成功改造的突變菌株; 所述絲狀真菌是嗜熱毀絲霉或黑曲霉。
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