山東福洋生物科技股份有限公司張雷達獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉山東福洋生物科技股份有限公司申請的專利一種生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基及補料方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116179527B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202211697295.3,技術領域涉及:C12N9/90;該發明授權一種生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基及補料方法是由張雷達;李紀偉;趙偉;曹樂梅;齊丹萍;方健;張虎設計研發完成,并于2022-12-28向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基及補料方法在說明書摘要公布了:本發明公開了一種生產D?阿洛酮糖?3差向異構酶的補料培養基及補料方法,屬于微生物發酵技術領域。本發明采用特定比例的葡萄糖、玉米漿、黃豆餅粉及微量元素制作成一定碳氮比且同時具有速效氮源、遲效氮源及微量元素的補料培養基,并以枯草芽孢桿菌為發酵菌種,在發酵過程中,采用流加的方式加入補料,同時通過發酵過程中pH?溶氧?補料偶聯調控,盡可能的提高菌體濃度和D?阿洛酮糖?3差向異構酶的活性。本發明方法操作簡單,降低了生產成本,縮短了發酵周期,顯著提高了目的酶的酶活。
本發明授權一種生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基及補料方法在權利要求書中公布了:1.一種以生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基進行補料的方法,其特征在于,建立pH-溶氧-補料偶聯調控發酵機制,具體步驟如下: 1將重組枯草芽孢桿菌按1%的接種量接種在LB培養基中,37℃、轉速220rpm搖瓶培養6-10h,得到種子液,測其OD600nm=2.08-6.04; 2將種子液接種于發酵培養基中培養發酵,發酵初始pH值為6.02-6.5;該階段通過控制DO使OD600nm以1-3h增長,控制發酵參數:溫度37℃,通風比0.5VVM,罐壓0.02或0.05Mpa,轉速150或200rmin; 3發酵至OD600nm=5.04-14.97時,初始配料中的葡萄糖耗盡,溶氧回升至20.0%以上,開始流加補料;流加補料后,溶氧降至20%以下,進入菌體快速增長階段,控制pH以0.05-0.11h下降,補料流加速度為100-150gL;本階段控制發酵參數:溫度37±0.5℃,罐壓0.02~0.05Mpa,通過調節轉速和風量控制DO10~20%; 4發酵15-25h,pH不再下降,進入D-阿洛酮糖-3差向異構酶生產階段,控制pH以0.11-0.25h回升,補料流加速度為100-170gL;本階段控制發酵參數:溫度37±0.5℃,罐壓0.02~0.05Mpa,通過調節轉速和風量控制DO10~20%; 5發酵38-45h,pH回升至8.02-8.51,OD600nm=151.4-197.4,停止流加補料; 6發酵45-50h,溶氧回升至40%以上,HPLC檢測胞外酶活達到801.2-1002.3UML,結束發酵; 7發酵液離心得到粗酶液; 所述生產D-阿洛酮糖-3差向異構酶的補料培養基,由如下原料組成:葡萄糖、玉米漿、黃豆餅粉和微量元素,其中微量元素相對于車間葡萄糖的添加量為0.15-0.5gL,黃豆餅粉和玉米漿的比例m:v為50-100:1,最終混合補料碳氮比為5-10:1,pH為4.06-4.51。
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