合肥工業大學智能制造技術研究院;重慶市食品藥品檢驗檢測研究院沈益忠獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉合肥工業大學智能制造技術研究院;重慶市食品藥品檢驗檢測研究院申請的專利一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119198603B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411226763.8,技術領域涉及:G01N21/33;該發明授權一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法是由沈益忠;汪恒;吳國建;李莎設計研發完成,并于2024-09-03向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法在說明書摘要公布了:一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法,包括如下步驟:步驟1:測定不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品的待測液在420nm處吸光度值A;步驟2:測定不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品的待測液在330nm波長激發下的420nm和550nm處熒光強度信號比值F420nmF550nm;步驟3:構建標準品的線性回歸方程;步驟4:取待測樣品,重復步驟1、2獲得待測樣品的吸光度值以及待測樣品的熒光強度信號比值F420nmF550nm,分別代入相應的線性方程,獲得待測樣品中的氨基甲酸乙酯的濃度。本發明的雙模態檢測結合了比色法和熒光法的優勢,提升了檢測的全面性和準確性。比色法提供直觀的視覺信息,但靈敏度有限;而熒光法則具備更高的靈敏度和選擇性。通過將兩者結合,雙模態檢測能夠在實際樣本中更可靠地識別和量化目標物質,相比于單一檢測具有更高的準確性。
本發明授權一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法在權利要求書中公布了:1.一種基于類漆酶活性納米酶雙模態檢測酒類中氨基甲酸乙酯的方法,其特征在于:包括如下步驟: 步驟1:測定不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品的待測液在420nm處吸光度值A: 在常溫條件下,把Cu-BH@MIP納米酶、鄰苯二胺和不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品加入HEPES緩沖液,攪拌均勻得到混合溶液,之后轉移至比色皿;接著用紫外分光光度計測量420nm處的吸光度值,將其記為A; 步驟2:測定不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品的待測液在330nm波長激發下的420nm和550nm處熒光強度信號比值F420nmF550nm; 在常溫條件下,把Cu-BH@MIP納米酶、鄰苯二胺和不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品加入HEPES緩沖液,攪拌均勻得到混合溶液,之后轉移至比色皿;接著在330nm激發波長下用熒光光譜儀測量420nm和550nm處熒光強度信號值,獲得熒光強度信號比值F420nmF550nm; 步驟3:構建標準品的線性回歸方程 利用不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品所測得吸光度值A值和標準品的濃度構建紫外線性回歸方程A=XCEC+y,其中CEC為標準品濃度; 利用不同濃度梯度的氨基甲酸乙酯標準品所測得熒光強度信號比值F420nmF550nm和標準品的濃度構建比率熒光信號線性回歸方程F420nmF550nm=XCEC+y,其中CEC為標準品濃度; 步驟4:取待測樣品,重復步驟1、2獲得待測樣品的吸光度值以及待測樣品的熒光強度信號比值F420nmF550nm,分別代入相應的線性方程,獲得待測樣品中的氨基甲酸乙酯的濃度; 步驟1和步驟2中,HEPES緩沖液的pH值為8.8-9.2;鄰苯二胺的濃度為10.0mmolL;Cu-BH@MIP納米酶的濃度為100μgmL;混合溶液的總量為200.0μL;攪拌時的反應溫度為50.0℃;反應時間為27.0min; 步驟3中,紫外線性回歸方程為A=-0.00201CEC+1.6875;比率熒光信號線性回歸方程為F420nmF550nm=0.0306CEC+0.52762; 所述Cu-BH@MIP納米酶的制備方法包括下列步驟: S1:將CuCl2·2H2O和2-氨基對苯二甲酸溶解在DMF溶液中獲得溶液A,將組氨酸溶解在乙醇與DMF溶液的混合物中,獲得溶液B;然后在不斷攪拌的條件下,將溶液A加入溶液B中;然后將混合物轉移到密封的Teflon-高壓釜中,在100-140℃下加熱5-12小時;高壓釜自然冷卻后獲得的產品離心,沉淀物用酒精和水洗滌,烘干保存,得到Cu-BH納米酶; S2:將Cu-BH納米酶、氨基甲酸乙酯和乙醇加入一容器中,超聲至溶解;羧乙基硅三醇鈉鹽和原硅酸四乙酯置于所述容器中,在黑暗條件下連續攪25-35min后,加入氨水,在20-30℃下連續攪拌過夜;沉淀物用乙醇洗滌,離心棄上清;沉淀物中原始EC模板采用甲醇索氏萃取法提取,得到Cu-BH@MIP沉淀;該聚合物在55-65℃的真空室中干燥過夜,得到Cu-BH@MIP納米酶。
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