中國計量大學屠佳宇獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉中國計量大學申請的專利一種昆蟲共生菌的培養方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120272330B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510759451.1,技術領域涉及:C12N1/14;該發明授權一種昆蟲共生菌的培養方法是由屠佳宇;武志強;李雅彬;俞曉平;申屠旭萍;許益鵬設計研發完成,并于2025-06-09向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種昆蟲共生菌的培養方法在說明書摘要公布了:本發明屬于微生物培養技術領域,公開了一種昆蟲共生菌的培養方法,該方法包括如下步驟:步驟S1,昆蟲細胞飼養層的制備;步驟S2,昆蟲卵的收集;步驟S3,昆蟲卵的消毒;步驟S4,昆蟲卵的破碎與共生菌接種培養;步驟S5,昆蟲共生菌的分離與擴大培養。本發明采用昆蟲細胞飼養層來培養昆蟲共生菌,通過利用飼養層細胞分泌的細胞因子或其他未知成分等來促進難以直接培養的共生菌的生長和繁殖。
本發明授權一種昆蟲共生菌的培養方法在權利要求書中公布了:1.一種昆蟲共生菌的培養方法,其特征在于,包括以下步驟: 步驟S1、昆蟲細胞飼養層的制備:將Sf9細胞接種到細胞培養皿中,置于27℃培養箱中培養,直至細胞匯合度達到70%,再用終濃度為100μgmL的絲裂霉素C處理2小時后,更換為新鮮的昆蟲細胞培養基,獲得所述Sf9細胞飼養層; 步驟S2、昆蟲卵的收集:將配對后的褐飛虱(Nilaparvatalugens)雌成蟲接到其寄主植物水稻上進行產卵,2~5天后解剖植物組織,收集所述褐飛虱卵; 步驟S3、昆蟲卵的消毒:將步驟S2中收集的昆蟲卵先用0.25%次氯酸鈉溶液消毒5分鐘,再用75%酒精消毒5分鐘,最后用1×PBS漂洗3次; 步驟S4、昆蟲卵的破碎與共生菌接種培養:將步驟S3消毒得到的卵用眼科剪剪碎或用小研磨棒碾碎,加入適量細胞培養基,使卵中的共生菌游離出來,用移液器將游離出來的共生菌接入到步驟S1制備的含有Sf9細胞飼養層的細胞培養皿中進行培養; 步驟S5、昆蟲共生菌的分離與擴大培養:將步驟S4中繁殖生長出的共生菌在YPD培養基平板上進行劃線培養,再挑取單菌落進行搖菌培養; 其中,所述的共生菌為屬于莫氏黑粉菌屬(Moesziomyces)的真菌。
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