南方醫科大學南方醫院鄭磊獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉南方醫科大學南方醫院申請的專利膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法、試劑盒及其應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116254225B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310315720.6,技術領域涉及:C12N5/078;該發明授權膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法、試劑盒及其應用是由鄭磊;劉春辰;林慧嫻;潘煒倫;李博;于海洋;麥雪盈設計研發完成,并于2023-03-27向國家知識產權局提交的專利申請。
本膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法、試劑盒及其應用在說明書摘要公布了:本發明公開了一種膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法、試劑盒及其應用。所述方法,包括如下步驟:將待處理的細胞外囊泡EVs樣本、兩個特異性靶向EVs膜蛋白標志物的抗體核酸復合物與能連接兩個抗體核酸復合物的RNA連接鏈孵育,得到DNA?RNA雜合體,實現EVs雙陽性膜蛋白的捆綁;通過功能化磁珠特異性地捕獲DNA?RNA雜合體,實現膜蛋白雙陽性特異EVs亞群的分離;通過酶切核酸鏈實現膜蛋白雙陽性特異EVs亞群的富集。本發明提供的技術可實現膜蛋白雙陽性特異EVs亞群無損分離富集,既能保證EVs數量,又能保證質量,還具有通用性,可根據實際需要更換抗體或靶向膜表面分子的識別原件實現雙靶標陽性EVs亞群無損分離富集。
本發明授權膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法、試劑盒及其應用在權利要求書中公布了:1.一種膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群分離富集方法,其特征在于,包括如下步驟: 將待處理的細胞外囊泡樣本、兩個特異性靶向細胞外囊泡膜蛋白標志物的抗體核酸復合物與能連接兩個所述抗體核酸復合物的RNA連接鏈孵育,得到DNA-RNA雜合體,實現細胞外囊泡雙陽性膜蛋白的捆綁; 通過功能化磁珠特異性地捕獲所述DNA-RNA雜合體,實現膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群的分離,所述功能化磁珠為偶聯了能特異識別所述DNA-RNA雜合體的第二抗體的免疫磁珠; 通過酶切核酸鏈實現膜蛋白雙陽性特異細胞外囊泡亞群的富集; 兩個所述抗體核酸復合物分別為第一抗體-DNA1偶聯物和第一抗體-DNA2偶聯物,所述第一抗體-DNA1偶聯物為CD9抗體-DNA1偶聯物、CD63抗體-DNA1偶聯物和CD81抗體-DNA1偶聯物;用于分離富集紅細胞、白細胞、血小板、血管上皮細胞來源細胞外囊泡的第一抗體-DNA2偶聯物分別選自CD235a抗體-DNA2偶聯物、CD45抗體-DNA2偶聯物、CD41a抗體-DNA2偶聯物、CD144抗體-DNA2偶聯物; 所述DNA1、DNA2和RNA連接鏈的序列分別如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.5所示; 所述第二抗體選自AbS9.6; 所述酶為核酸內切酶RNaseH。
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