江南大學王小元獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉江南大學申請的專利一種能高效生產單磷酸類脂A疫苗佐劑的重組大腸桿菌獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116536233B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-26發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310404567.4,技術領域涉及:C12N1/21;該發明授權一種能高效生產單磷酸類脂A疫苗佐劑的重組大腸桿菌是由王小元;王震;趙愛珍;喬君;汪宸卉設計研發完成,并于2023-04-17向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種能高效生產單磷酸類脂A疫苗佐劑的重組大腸桿菌在說明書摘要公布了:本發明公開了一種能高效生產單磷酸類脂A疫苗佐劑的重組大腸桿菌,屬于基因工程和合成生物學領域。本發明敲除大腸桿菌MG1655中膜壁表層分子、磷脂和葡萄糖轉運、磷酸乙醇胺修飾以及enoyl?ACP還原酶相關的132個基因,表達類脂A修飾基因FnlpxE、SepagP和SepagL,構建了菌株MW021pTEPL。MW021pTEPL的生長性能大幅度提高且發酵過程中不再需要抗生物和誘導劑;在2?L發酵罐體系中,MW021pTEPL生長的最高OD600能達到38.54,能生產13.84gL的干細胞和約88.99mgL的總lipidA;總lipidA中只含有兩種結構,分別為MPL和D?MPLA。
本發明授權一種能高效生產單磷酸類脂A疫苗佐劑的重組大腸桿菌在權利要求書中公布了:1.一種重組大腸桿菌,其特征在于,所述重組大腸桿菌敲除了大腸桿菌基因組上的菌毛基因簇、鞭毛基因簇、腸共同抗原基因簇、磷脂轉運系統相關基因:mlaA、mlaC和pldA基因、葡萄糖轉運相關基因:ptsG基因、磷酸乙醇胺修飾相關基因:eptA基因以及FabI三氯生系統中相關必需基因:fabI基因,并過表達了來自弗朗西斯菌基因組中的脫磷酸酶和沙門氏菌基因組中的十六?;D移酶和脫酰基酶; 所述菌毛基因簇由12個操縱子共64個基因組成,分別為yagV,yagW,yagX,yagY,yagZ,gltF,yhcA,yhcD,yhcE,yhcF,fimA,fimI,fimC,fimD,fimF,fimG,fimH,sfmA,sfmC,sfmD,sfmH,sfmF,ycbQ,ycbR,ycbS,ycbT,ycbU,ycbV,ycbF,ydeQ,ydeR,ydeS,ydeT,yraH,yraI,yraJ,yraK,yadC,yadK,yadL,yadM,htrE,yadV,yadN,yehA,yehB,yehC,yehD,ybgO,ybgP,ybgQ,ybgD,yfcO,yfcP,yfcQ,yfcR,yfcS,yfcT,yfcU,yfcV,ygiL,yqiG,yqiH,yqiI,其序列的NCBI登錄號依次為b0289,b0290,b0291,b0292,b0293,b3214,b3215,b3216,b4569,b3219,b4314,b4315,b4316,b4317,b4318,b4319,b4320,b0530,b0531,b0532,b0533,b0534,b0938,b0939,b0940,b0941,b0942,b0943,b0944,b1502,b1503,b1504,b1505,b3142,b3143,b3144,b3145,b0135,b0136,b0137,b0138,b0139,b0140,b0141,b2108,b2109,b2110,b2111,b0716,b0717,b0718,b0719,b2332,b2333,b2334,b2335,b2336,b2337,b2338,b2339,b3043,b3046,b3047,b3048; 所述鞭毛基因簇由4個操縱子共50個基因組成,分別為fliE,fliF,fliG,fliH,fliI,fliJ,fliK,fliL,fliM,fliN,fliO,fliP,fliQ,fliR,fliY,fliZ,fliA,fliC,fliD,fliS,fliT,flgN,flgM,flgA,flgB,flgC,flgD,flgE,flgF,flgG,flgH,flgI,flgJ,flgK,flgL,flhE,flhA,flhB,cheZ,cheY,cheB,cheR,tap,tar,cheW,cheA,motB,motA,flhC和flhD,其序列的NCBI登錄號依次為946446,946448,946451,946456,946457,946454,946449,946443,946442,946423,946458,946462,946463,946464,948833,946833,948824,949101,946428,946429,946433,945634,946684,946300,945678,946687,945813,945636,945639,945647,946996,947534,947456,945648,945646,946094,946390,946391,946392,946393,946394,946396,946397,946399,946400,946401,946402,947564,947280和945442; 所述腸共同抗原基因簇由1個操縱子組成,所述rfe-rffM操縱子由rfe、wzzE、wecB、wecC、rffG、rffH、rffC、wecE、wzxE、wecF、wzyE、rffM共12個基因組成,其序列的NCBI上登錄號依次為NP_418231.1、NP_418232.1、YP_026253.1、YP_026254.1、YP_026255.1、NP_418236.1、YP_026256.1、NP_418238.1、NP_418239.1、YP_026257.1、NP_418241.1、NP_418242.1; 所述磷酸轉運系統相關基因:mlaA、mlaC和pldA,其序列的NCBI上登錄號為NP_416848.1、NP_417659.1、NP_418265.1; 所述葡萄糖轉運相關基因:ptsG基因、磷酸乙醇胺修飾相關基因:eptA基因以及FabI三氯生系統中相關必需基因:fabI基因,其序列的NCBI上登錄號依次為NP_415619.1、NP_418538.2、NP_415804.1; 所述來自弗朗西斯菌lpxE基因的序列的NCBI登錄號為WP_159184080.1;所述來自沙門氏菌pagP和pagL基因的序列的NCBI登錄號分別為NP_459620.1、NP_416848.1。
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