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龍圖騰網(wǎng)獲悉廣東海洋大學(xué)深圳研究院;深圳義海生物科技有限公司申請(qǐng)的專利一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法及應(yīng)用獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN116064635B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-22發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202211126859.8，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/79；該發(fā)明授權(quán)一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法及應(yīng)用是由胡惠玲;汪志文;夏洪麗;徐露茜;黃子威;魯義善;夏立群設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2022-09-16向國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法及應(yīng)用在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法及應(yīng)用，提取尼羅羅非魚腸道組織的RNA并合成cDNA；對(duì)尼羅羅非魚CD36基因的編碼序列片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到尼羅羅非魚CD36蛋白基因；然后構(gòu)建尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體pEGFP?N1?CD36。本發(fā)明制備的尼羅羅非魚CD36蛋白的核苷酸序列的真核表達(dá)載體可用于制備提高羅非魚抗鏈球菌免疫力的制品，該制品制備簡單易操作，成本低；本發(fā)明通過在羅非魚體內(nèi)過表達(dá)尼羅羅非魚CD36蛋白來增強(qiáng)羅非魚抗鏈球菌的能力，使得感染無乳鏈球菌的羅非魚的存活率提高60％。另外，通過在羅非魚體內(nèi)過表達(dá)尼羅羅非魚CD36蛋白還可以降低羅非魚體內(nèi)的無乳鏈球菌載量，由此可以看出，本發(fā)明技術(shù)方案可以有效誘導(dǎo)羅非魚機(jī)體細(xì)胞免疫。

本發(fā)明授權(quán)一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法及應(yīng)用在權(quán)利要求書中公布了：1.一種尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體在制備提高羅非魚抗無乳鏈球菌免疫制品中的應(yīng)用，其特征在于，所述尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體的制備方法，包括以下步驟： S1、提取尼羅羅非魚腸道組織的RNA并合成cDNA； S2、以羅非魚腸道cDNA為模板，利用合成的上游引物CD36-F:5’GAAGGAAGGCAACACACACCAC-3’與下游引物CD36-R:5’GATTCATTCATCCAAGGTTTGTTTT-3’對(duì)尼羅羅非魚CD36基因的編碼序列片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測，獲得單一目的條帶大小的片段后，擴(kuò)大擴(kuò)增體系，電泳檢測，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化回收后連接pMD-18T載體，然后轉(zhuǎn)化到Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞中，涂板挑取單菌落進(jìn)行菌落PCR檢測，得到尼羅羅非魚CD36蛋白基因； S3、以含有尼羅羅非魚CD36蛋白基因ORF片段的pMD-18T質(zhì)粒即pMD-18T-CD36為模板，利用合成的上游引物pEGFP-N1-CD36-BamHI-F:5’-CGCGGATCCGACATGATCATTGAGAG-3’，下游引物pEGFP-N1-CD36-Xhol-R:5’-CCGCTCGAGTTGCTGTACTATCTCC-3’，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；T4連接酶將PCR擴(kuò)增目的片段與表達(dá)載體pEGFP-N1進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化到Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞中，涂板挑取單菌落進(jìn)行菌落PCR檢測，得到尼羅羅非魚CD36蛋白的真核表達(dá)載體pEGFP-N1-CD36。

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