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          華中農(nóng)業(yè)大學(xué)彭東海獲國家專利權(quán)

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          龍圖騰網(wǎng)獲悉華中農(nóng)業(yè)大學(xué)申請的專利一種青枯雷爾氏菌及高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán),本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予,授權(quán)公告號為:CN118995517B

          龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-22發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉:該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為:202411230906.2,技術(shù)領(lǐng)域涉及:C12N1/20;該發(fā)明授權(quán)一種青枯雷爾氏菌及高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法是由彭東海;劉守德;孫明;鄭金水;李琪鳳設(shè)計(jì)研發(fā)完成,并于2024-09-04向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

          一種青枯雷爾氏菌及高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法在說明書摘要公布了:本發(fā)明公開了一種青枯雷爾氏菌及高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法,屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過篩選得到了一株新型青枯雷爾氏菌RalstoniasolanacearumBMB?Rs0001,其保藏號為CCTCCNO:M20241876,該菌株作為宿主菌可以顯著提高青枯雷爾氏菌噬菌體發(fā)酵的爆發(fā)量。同時(shí),本發(fā)明通過對發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵溫度及補(bǔ)料工藝進(jìn)行改進(jìn),最終大幅度提高了青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵產(chǎn)量,效價(jià)最高可達(dá)1.05×1012PFUmL,同時(shí)提高了噬菌體的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和植物防病效果。本發(fā)明方法獲得的青枯雷爾氏菌噬菌體在180天內(nèi)4℃和25℃條件下的儲(chǔ)存穩(wěn)定性顯著增強(qiáng),植物青枯病的防治率也從72.82%提升至90.51%。

          本發(fā)明授權(quán)一種青枯雷爾氏菌及高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法在權(quán)利要求書中公布了:1.一種高產(chǎn)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵方法,其特征在于,該方法包括如下步驟: (1)青枯雷爾氏菌宿主菌的發(fā)酵培養(yǎng):將保藏號為CCTCCNO:M20241876的青枯雷爾氏菌RalstoniasolanacearumBMB-Rs0001種子液,接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行宿主菌培養(yǎng),通過調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速及進(jìn)氣量控制溶解氧≥40%,第0~4小時(shí)控制發(fā)酵溫度為30~33℃,第4~8小時(shí)控制發(fā)酵溫度為35~38℃,得到宿主菌發(fā)酵培養(yǎng)液; (2)青枯雷爾氏菌噬菌體的發(fā)酵培養(yǎng):將噬菌體種子液接種至步驟(1)得到的宿主菌發(fā)酵培養(yǎng)液中進(jìn)行噬菌體培養(yǎng),通過調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速及進(jìn)氣量控制溶解氧為18~22%,第0~4小時(shí)培養(yǎng)溫度為28~35℃,第4~8小時(shí)培養(yǎng)溫度為25~30℃;第2~4小時(shí)內(nèi),分2~4次補(bǔ)加等量的營養(yǎng)培養(yǎng)基,營養(yǎng)培養(yǎng)基的補(bǔ)加總量為發(fā)酵體積的5~10%;第6~8小時(shí)內(nèi),補(bǔ)加無機(jī)鹽混合液,無機(jī)鹽混合液的補(bǔ)加量為發(fā)酵體積的0.3~0.8%; 步驟(1)中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分包括:果葡糖漿,豆粕,酵母抽提物,玉米漿干粉,肌醇,谷氨酸鈉,K2HPO4?3H2O,MgSO4?H2O; 步驟(2)中所述營養(yǎng)培養(yǎng)基的組分包括:蔗糖,谷氨酸鈉,肌醇,L-天冬氨酸; 步驟(2)中所述無機(jī)鹽混合液的組分包括:CaCl2?2H2O,K2HPO4?3H2O,KH2PO4,MnCl2?4H2O; 步驟(2)發(fā)酵培養(yǎng)過程中,當(dāng)活細(xì)胞數(shù)值≤2.5pFcm時(shí),補(bǔ)加宿主菌菌懸液。

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