淇嘉科技(蘇州)有限公司吳迪獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉淇嘉科技(蘇州)有限公司申請的專利原始消化管分區通用型誘導方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120330129B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-09發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510821406.4,技術領域涉及:C12N5/071;該發明授權原始消化管分區通用型誘導方法是由吳迪;劉彥財;劉雪設計研發完成,并于2025-06-19向國家知識產權局提交的專利申請。
本原始消化管分區通用型誘導方法在說明書摘要公布了:本發明提供了一種原始消化管分區通用型誘導方法,該方法包括如下步驟:高質量人多能干細胞檢定、多能干細胞敏性檢驗、細胞接種及啟動匯合度檢定、內?中胚層共誘導、原始消化管誘導和原始消化管分區。與傳統方法相比,本發明在不依賴血清的前提下,可高效地產生肺、胃、肝、胰、小腸、大腸等不同類器官的原始消化管分區衍生物(3D球體形式),便于后續向終產物批量化制備。本發明將有助于推動呼吸消化道類器官的大規模產業轉化與應用。
本發明授權原始消化管分區通用型誘導方法在權利要求書中公布了:1.一種原始消化管分區通用型誘導方法,其特征在于:該方法包括如下步驟: S1、準備階段: S11、準備階段1:在分化日-5,PSC多能性鑒定 取多能干細胞進行流式細胞術檢定,當SSEA4+NANOG+≥90%時,視為通過測試; S12、準備階段2:在分化日-3,PSC敏感度檢驗 敏感度測試方法如下: 取通過多能性檢定的PSC,消化并接種于底層基質LN521及LN111上,體積比1:3,終濃度5μgml,加入mTeSR1培養基培養至匯合度達70-90%時,將干細胞培養基換為含有100ngmlActA的RPMI-1640;24h后觀察,若匯合度降低超過50%,視為通過測試; S13、準備階段3:在分化日-1-0,分化接種與啟動匯合度檢驗 取通過敏感度測試的PSC接種于分化板,培養基質與S12相同,即體積比為1:3的LN521和LN111,繼續使用mTeSR1培養基培養待匯合度達70%-90%,啟動分化; S2、分化階段: S21、分化階段1:在分化日1-3,內-中胚層共誘導 在培養基1中培養1天,培養基1包括添加劑和基礎培養基,添加劑包括50ngmlBMP4、100ngmlActA,基礎培養基為RPMI-1640; 接著在培養基2中培養1天,培養基2包括添加劑和基礎培養基,添加劑包括100ngmlActA、10ngmlFGF2,基礎培養基為添加有0.4%體積比KSR的RPMI-1640; 然后在培養基3中培養1天,培養基3包括添加劑和基礎培養基,添加劑包括100ngmlActA、10ngmlFGF2,基礎培養基為添加有4%體積比KSR的RPMI-1640; 每日更換培養基; S22、分化階段2:在分化日4-5,原始消化管誘導 該階段使用的培養基包括括添加劑和基礎培養基,添加劑包括50ngmlFGF7、0.5mMVc,基礎培養基為添加有1.5%體積比KSR的Ad-DMEMF12,期間每日更換培養基; S23、分化階段3:原始消化管分區 該階段使用的基礎培養基為:添加有2%體積比KSR的Ad-DMEMF12; 各分區誘導因子為: 1、原始消化管前段前部,肺區: 分化日6-8: 10μMSB431542、1μMSAG、200ngmlNOG、500ngmlFGF4、3μMCHIR99021; 2、原始消化管前段后部,胃區: 分化日6-7: 200ngmlNOG、500ngmlFGF4、3μMCHIR99021; 分化日8: 2μMRA、200ngmlNOG、500ngmlFGF4、3μMCHIR99021; 3、原始消化管前段后部,肝區: 分化日6-7: 500ngmlFGF4、3μMCHIR99021; 4、原始消化管前段后部,胰區: 分化日6-9: 500ngmlFGF4、3μMCHIR99021、50ngmlFGF7、0.25μMSANT-1、0.25μMTPPB、0.1μMLDN193189; 5、原始消化管中-后段,小腸區: 分化日6-9: 500ngmlFGF4、500ngmlWNT3a; 6、原始消化管后段,結腸區: 分化日6-11: 500ngmlFGF4、500ngmlWNT3a; 分化日12-14: 100ngmlBMP2。
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