博迪泰(廈門)生物科技有限公司;廣州勝全生物技術有限公司李明智獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉博迪泰(廈門)生物科技有限公司;廣州勝全生物技術有限公司申請的專利一種基于循環指數擴增結合CRISPR/Cas12a的邏輯門檢測方法及試劑盒獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119570935B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-02發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411787480.0,技術領域涉及:C12Q1/6886;該發明授權一種基于循環指數擴增結合CRISPR/Cas12a的邏輯門檢測方法及試劑盒是由李明智;任文靜;張睿;李博安設計研發完成,并于2024-12-06向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種基于循環指數擴增結合CRISPR/Cas12a的邏輯門檢測方法及試劑盒在說明書摘要公布了:本發明屬于生物檢測技術領域,具體涉及一種基于循環指數擴增結合CRISPRCas12a的邏輯門檢測方法及試劑盒。本發明的檢測方法主要過程如下:miRNA?210與模板結合激活循環指數擴增,獲得的產物P1可以作為Cas12acrRNA1的催化劑。當miRNA?21存在時,miRNA?21可以作為crRNA2,crRNA1與crRNA2協同構成crRNA完整間隔區序列,激活Cas12a反式切割活性,產生可檢測的熒光信號。本發明利用miRNA?21作為crRNA結構中的間隔區序列,展現miRNA作為功能性元件的普遍適用性,建立一種AND邏輯門實現對多個miRNA進行同時檢測和結果的邏輯判斷。
本發明授權一種基于循環指數擴增結合CRISPR/Cas12a的邏輯門檢測方法及試劑盒在權利要求書中公布了:1.一種基于循環指數擴增結合CRISPRCas12a的邏輯門檢測方法,所述邏輯門檢測方法用于非診斷或治療目的,其特征在于,包括以下過程: S1、待測核酸miRNA-21與miRNA-210的提?。?S2、DMCas預混液的制備:將DNA聚合酶、切刻內切酶、dNTP、模板、探針、LbCas12a酶、crRNA1、10×reactionbuffer1、10×reactionbuffer2、滅菌超純水混合即得; S3、將步驟S1提取的待測核酸miRNA-21與miRNA-210加入到步驟S2制備的DMCas預混液中,進行恒溫定時反應,檢測熒光信號并分析結果,即得; 步驟S2中所述的模板序列如SEQIDNO.4所示;所述crRNA1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述探針的序列為5’-ROX-CCCCCC-BHQ2-3’;所述10×reactionbuffer1包括氯化鈉、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、氯化鎂、二巰基蘇糖醇;所述10×reactionbuffer2包括乙酸鉀、三醋酸酯、乙酸鎂、重組白蛋白;所述切刻內切酶為Nb.BbvCI。
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