淇嘉科技(蘇州)有限公司;天津國際生物醫藥聯合研究院吳迪獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉淇嘉科技(蘇州)有限公司;天津國際生物醫藥聯合研究院申請的專利多譜系肝類器官代謝性成熟方法及應用獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN120192915B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-09-02發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202510670972.X,技術領域涉及:C12N5/071;該發明授權多譜系肝類器官代謝性成熟方法及應用是由吳迪;王莉莉;厲佳雪設計研發完成,并于2025-05-23向國家知識產權局提交的專利申請。
本多譜系肝類器官代謝性成熟方法及應用在說明書摘要公布了:本發明提供了一種多譜系肝類器官代謝性成熟方法及應用,該方法可在維持肝臟生理相關的多種細胞類型的前提下,顯著提高代謝相關基因表達水平,包括藥物代謝(I相代謝酶、II相代謝酶及III相轉運體)、脂質代謝、糖代謝、以及膽汁酸代謝相關標志物等;且整體表達譜接近原代肝組織,由該方法產生的成熟肝類器官尤其適用于臨床前藥物的肝毒篩選、代謝評價等應用。
本發明授權多譜系肝類器官代謝性成熟方法及應用在權利要求書中公布了:1.一種多譜系肝類器官代謝性成熟方法,其特征在于:該方法包括如下步驟: S1、誘導PSC形成至少具有肝血竇內皮細胞、肝細胞、膽管細胞、巨噬細胞以及肝星狀細胞的多譜系肝類器官; S11、先使用含有50ngmlBMP4、100ngmlActivinA、體積比2%B27的RPMI-1640培養基培養1天,再使用含有100ngmlActivinA、5ngmlBMP4、50ngmlbFGF、體積比2%B27的RPMI-1640培養基培養2-3天,產生HAND1+中胚層及FOXA2+內胚層; S12、使用含有體積比2%的B27、體積比23%的StemPro34、體積比75%的IMDM、10ngmlBMP4、500ngmlbFGF、3μMCHIR99021的培養基繼續誘導產生含KDR+中胚祖細胞的HHEX+、HNF4α+前腸后側內胚層; S13、將S2得到的衍生物進行酶解消化、離心收集,并使用含有體積比2%的B27、體積比23%的StemPro34、體積比75%的IMDM、100ngmlVEGF、10ngmlEGF、10ngmlbFGF、3μMCHIR99021、2.5μMA83-01的培養基重懸單細胞后,加入0.25mgml的COL-1、1μgml的LN-411,進行3D重聚合; 培養至更換培養基后,繼續使用該階段培養基誘導產生含CD31+CD34+初生內皮細胞的肝內胚層,且之后不再添加COL1和LN411; S14、使用含有含有體積比7.5%的FBS、體積比17.5%的StemPro34、體積比75%的HCM、10ngmlHGF、20ngmlOSM、1μMFSK、500μM8-Br-cAMP、0.5μMDEX的培養基繼續誘導產生血竇網絡化肝類器官; S2、代謝成熟化培養:使用含有促成熟誘導因子的促成熟培養基繼續培養多譜系肝類器官,至類器官實現成熟化;其中,促成熟誘導因子包括10-75ngmlHGF、10-75ngmlOSM、20-80ngmlCOL-1、2-8μM甲狀腺激素T3、TGFβ抑制劑、γ-分泌素抑制劑以及0.5-2.5μMDEX,促成熟培養基還包括體積比2%的B27、體積比為5-30%的StemPro34和體積比為50-95%William'sE;TGFβ抑制劑為A83-01、SB431542、RepSox中的任一種,A83-01的濃度為1-7.5μM,SB431542的濃度為10-50μM,RepSox的濃度為1-7.5μM; γ-分泌素抑制劑為DBZ、RO4929097、CompoundE中的任一種,DBZ的濃度為0.5-3μM,RO4929097的濃度為10-30μM,CompoundE的濃度為2-5μM。
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