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龍圖騰網(wǎng)獲悉深圳市中醫(yī)院申請(qǐng)的專利腎小管類器官培養(yǎng)基及應(yīng)用、腎小管類器官的培養(yǎng)方法獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN116218762B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-08-29發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202310289514.2，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N5/071；該發(fā)明授權(quán)腎小管類器官培養(yǎng)基及應(yīng)用、腎小管類器官的培養(yǎng)方法是由邵牧民;江徐;余學(xué)問;孫惠力設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2023-03-13向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本腎小管類器官培養(yǎng)基及應(yīng)用、腎小管類器官的培養(yǎng)方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明提供了一種腎小管類器官培養(yǎng)基及應(yīng)用、腎小管類器官的培養(yǎng)方法。本發(fā)明的腎小管類器官培養(yǎng)基對(duì)于腎小管類器官的生長(zhǎng)有較好的支持和促進(jìn)作用，7天左右即可獲得典型的腎小管類器官，在體外較好的保留了患者來源的組織一致性和異質(zhì)性，為進(jìn)一步進(jìn)行腎小管研究應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)；本發(fā)明的腎小管類器官的培養(yǎng)方法，采用本發(fā)明的腎小管類器官培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，能夠有效的模擬腎小管組織，可為腎小管相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)理、致病因素研究和正常腎小管組織藥物毒性研究提供強(qiáng)大平臺(tái)；本發(fā)明的培養(yǎng)方法步驟簡(jiǎn)便清晰，操作人員對(duì)培養(yǎng)結(jié)果影響較小，提高了培養(yǎng)結(jié)果的一致性，為后續(xù)大規(guī)模培養(yǎng)提供了便利條件。

本發(fā)明授權(quán)腎小管類器官培養(yǎng)基及應(yīng)用、腎小管類器官的培養(yǎng)方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種腎小管類器官的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟： 獲取腎組織樣本； 對(duì)腎組織樣本進(jìn)行清洗、消化、重懸，得到腎細(xì)胞沉淀； 將腎小管類器官培養(yǎng)基與腎細(xì)胞沉淀混合，得到細(xì)胞溶液； 將細(xì)胞溶液與Matrigel基質(zhì)膠混合，然后接種至孔板中，接種完成后，靜置直至Matrigel基質(zhì)膠凝固； 待Matrigel基質(zhì)膠凝固后，再加入腎小管類器官培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，即得腎小管類器官； 對(duì)腎組織樣本進(jìn)行清洗、消化、重懸，得到腎細(xì)胞沉淀，具體包括以下步驟： 將腎組織樣本剪碎后，使用含有青霉素鏈霉素雙抗的DPBS溶液清洗； 向清洗后的腎組織樣本中加入胰酶消化液，并于37℃、體積濃度為5％的CO2培養(yǎng)箱中消化40～50min，再加入AdvancedDMEMF12基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化，再經(jīng)過離心分離，棄掉上清液，收集沉淀，即得腎細(xì)胞沉淀； 所述腎小管類器官培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、pH緩沖劑、抗氧化劑、血清替代物、人重組蛋白、TGF-β受體抑制劑、生長(zhǎng)因子、ROCK抑制劑；還包括原代細(xì)胞抗生素和青霉素鏈霉素雙抗； 所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為AdvancedDMEMF12基礎(chǔ)培養(yǎng)基；所述pH緩沖劑為HEPES緩沖劑；所述抗氧化劑為N-乙酰半胱氨酸；所述血清替代物為B-27supplement；所述人重組蛋白為R-Spondin-3；所述TGF-β受體抑制劑為A83-01；所述生長(zhǎng)因子包括EGF、FGF-10；所述ROCK抑制劑為Y27632；所述原代細(xì)胞抗生素為primocin； 所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的濃度為1～3mM，所述HEPES緩沖劑的濃度為10～25mM，所述N-乙酰半胱氨酸的濃度為0.5～2mM，所述B-27supplement的體積濃度為1～2％，所述R-Spondin-3的濃度為200～250ngmL，所述A83-01的濃度為5～10μM，所述EGF的濃度為50～100ngmL，所述FGF-10的濃度為50～100ngmL，所述Y27632的濃度為5～10μM，所述primocin的濃度為80～120μgmL，所述青霉素鏈霉素雙抗的濃度為50～100IUmL。

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