江西中醫藥大學鐘友寶獲國家專利權
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龍圖騰網獲悉江西中醫藥大學申請的專利細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN116034950B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-08-29發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202310234995.7,技術領域涉及:G01N15/14;該發明授權細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法是由鐘友寶;劉端勇;黃佳琦;張哲言;黃莉;趙海梅設計研發完成,并于2023-03-13向國家知識產權局提交的專利申請。
本細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法在說明書摘要公布了:本發明公開一種細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法,涉及生物醫藥技術領域,該細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法包括如下步驟:S1、結腸炎模型復制:S2、流式分選富集mTh17細胞:S3、mTh17細胞獲得性轉移誘導結腸炎:S4、結腸炎樣品采集:S5、疾病活動指數評定:S6、病理組織的處理:一、石蠟切片;二、蘇木素?伊紅染色;通過本申請提供的一種細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法,在體外獲得高表達IL?17A的記憶性Th17細胞;mTh17細胞獲得性轉移至SCID小鼠成功誘導結腸炎;這有助于解析mTh17細胞在UC發病中的作用機制,可用于評價新型抗UC藥物的療效,促進新型抗UC藥物的開發。
本發明授權細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法在權利要求書中公布了:1.一種細胞獲得性轉移誘導結腸炎的方法,其特征在于;包括如下步驟: S1、結腸炎模型復制:BALBc小鼠依次自由飲用2.5%的DSS溶液、自由飲水以及自由飲用2.5%的DSS溶液; S2、流式分選富集mTh17細胞:處理步驟S1中結腸炎BALBc小鼠得到單細胞懸液;染色緩沖液重懸細胞,400gmin離心4min棄上清,重復2次;染色緩沖液重懸細胞,受體阻斷劑封閉;分別加入流式抗體CD4、CD73,室溫避光孵30min;染色緩沖液重懸細胞,400gmin離心4min棄上清2次;染色緩沖液定容,經流式分選儀檢測后,收集管富集結腸炎小鼠mTh17細胞; S3、mTh17細胞獲得性轉移誘導結腸炎:SCID小鼠適應性飼養后,隨機均分成PBS和mTh17組,mTh17組腹腔注射mTh17細胞混合液,PBS組注射等體積的PBS溶液; S4、結腸炎樣品采集:收集小鼠結腸并預處理;將結腸組織濾紙吸干后稱重;取近端結腸置于4%多聚甲醛溶液中固定24h,余下組織液氮速凍后轉移至-80℃冰箱備用; S5、疾病活動指數評定:實驗過程中,小鼠稱重及觀察糞便粘稠度、便血情況,根據體重損失、糞便粘稠度和便血情況的評定疾病活動指數; S6、病理組織的處理:一、石蠟切片:a1、固定結腸組織:將近端結腸置于4%多聚甲醛溶液中固定24h;a2、修塊:修剪結腸組織至0.5-1.0cm厚,腸腔與水平面平行;a3、脫水;a4、透明;a5、浸蠟:a6、包埋結腸組織;a7、結腸石蠟切片制備;二、蘇木素-伊紅染色:b1、脫蠟:采用二甲苯脫蠟8min;b2、梯度酒精復水;b3、蘇木素染色;b4.伊紅染色;將結腸組織置于伊紅染液2min;自來水洗2min;b5、脫水:依次采用95%乙醇浸泡3min;100%乙醇浸泡3min;100%乙醇浸泡3min;b6、透明:采用二甲苯浸泡5min;b7、封片:中性樹膠封片,蓋上蓋玻片;b9、在光學顯微鏡下采集各組結腸病理圖片; 所述S2中流式抗體為CD4、CD73; 所述S3中mTh17組腹腔注射的細胞混合液為:5.0×105個CD4+CD73+mTh17細胞混合液; 所述S6中a4透明采用無水乙醇與二甲苯的體積比為2:1,室溫下浸泡15min,無水乙醇與二甲苯的體積比為1:2,室溫下浸泡7.5min,二甲苯Ⅰ室溫下浸泡3.5min,二甲苯Ⅱ室溫下浸泡1.5min。
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